固醇类靶向代谢检测

　　固醇类(Sterols)是一类具有环戊烷多氢菲核心结构的重要脂质分子，包括胆固醇(cholesterol)、植物甾醇(如β-谷甾醇、菜油甾醇)、胆汁酸(bile acids)、类固醇激素(如皮质醇、睾酮、雌二醇)等，在细胞膜结构、信号转导、能量代谢和内分泌调节中发挥关键作用。固醇类靶向代谢检测旨在对这些化合物进行高灵敏度、高特异性、绝对定量分析，广泛应用于临床诊断、代谢疾病研究、药物开发及营养学评估。

　　主流检测：LC-MS/MS(金标准)

　　由于固醇类极性低、缺乏强发色团/荧光基团，且结构相似(同分异构体多)，液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)是首选方法。

　　1. 色谱分离

　　色谱柱：

　　C18 反相柱(如 Waters Acquity UPLC BEH C18, 1.7 μm, 2.1×100 mm)

　　专用脂质柱(如 Phenomenex Kinetex C8)

　　流动相：

　　A：水 + 0.1% 甲酸

　　B：乙腈/异丙醇(9:1 或 8:2)+ 0.1% 甲酸

　　梯度洗脱：提升疏水性固醇(如胆固醇酯)的分离

　　柱温：50–60℃(改善峰形)

　　2. 质谱检测

　　离子化方式：电喷雾电离(ESI)，正离子模式([M+H]⁺ 或 [M+NH₄]⁺)

　　胆固醇常以 [M+NH₄]⁺(m/z 402.4)检测;

　　胆汁酸可加负离子模式([M-H]⁻)提高灵敏度。

　　扫描模式：多反应监测(MRM)

　　每个化合物选择 1–2 个母离子 → 子离子 transitions;

　　例如：

　　胆固醇：402.4 → 384.4(定量)，402.4 → 366.4(定性)

　　皮质醇：363.2 → 121.1

　　关键：使用同位素内标(IS)校正基质效应与回收率!

       来源：网络