18537125967 SPR原理
SPR是借助传统光学现象,利用光在不同介质中产生消逝波后与等离子波产生共振,进而可以构建生物分子相互作用的生物传感分析技术,用以检测生物传感芯片上配位体与分析物之间的相互作用情况。

SPR生物传感器的光源为偏振光,传感芯片表面镀有一层金膜,实验时,先将一种生物分子(靶分子)固定在金膜表面,然后将与之相互作用的分子溶于溶液(或混合液)流过芯片表面。在金膜芯片上的蛋白和流路中的分子结合有解离的过程中,共振角(即SPR角)就会随之发生变化,检测器检测到这种变化,根据此变化曲线作图分析,可得出分子间的结合常数Ka、解离常数Kd或亲和力常数KD。

SPR 测量系统
SPR 测量系统的核心部件包括光学系统、传感器芯片、液体处理系统三个主要部分,及其他的组成部分。
①光学系统:能够产生和测量SPR信号的光电组分称为光学检测单元。
②传感器芯片:传感器的芯片是其核心的部件。在SPR技术中必须首先有一个生物分子偶联在传感片上,然后用它去捕获可与之进行特异反应的生物分子。传感芯片又分为三个主要组成部分,分别是光波导耦合器件、金属膜以及分子敏感膜。
③液体处理系统:包括两个液体传送泵,其中一个泵负责保持稳定流速的液体流过传感芯片表面,另一个泵负责自动自动进样装置中的样品传送。
④其他部分:包括例如LED状态指示器和温度控制系统等。
SPR特点
①待分析物无需标记;
②实时动态监测(即定量结合亲和力、动力学和热力学);
③高通量能力非常灵敏,结果可重复;
④测量各种开机率、关断率和亲和力;
⑤所需待测样品量小;
⑥响应速度快。
SPR应用
1、生物药物质量控制
①免疫原性的评价
生物药物具有免疫原性,当反复多次给药后,在动物甚至人体内会产生抗体,这可能是重组蛋白与天然蛋白之间结构或性质存在差异导致的。抗药抗体会与药物形成复合物,从而中和药物活性或影响药物的正常代谢。因此,免疫原性是评价生物药物安全性的重要指标之一。SPR技术灵敏度高,可以用于检测低浓度的抗体免疫原性。
②结合活性的测定
在多数生物药物的质量标准中,活性检测是评价药物有效成分效价的重要指标。活性检测一般分为结合活性检测和生物学活性检测,前者是评价药物与靶点受体结合的能力,后者评价药物与靶点结合后,诱导相关免疫学反应的能力。目前用于结合活性检测的技术主要是ELISA。SPR技术已被多家公司应用于治疗用单抗类产品结合活性的考察。
③宿主细胞DNA残留的检测
传代细胞系的残留DNA具有致瘤性、病毒传染性,且其相关代谢途径和机制未知,对人类健康造成一定威胁,因此需要对宿主细胞残留DNA进行质量控制。目前常用手段是q-PCR技术,但PCR技术存在耗时长、易污染等检测问题。有研究表明,SPR技术可用于 DNA 的检测。
④微生物污染的控制
绝大多数生物药物为静脉注射或皮下注射制品,需要严格控制微生物污染,否则会给患者带来极大的安全风险。目前常用培养法,来对细菌等微生物进行鉴定和控制。但该方法具有耗时长、易污染等缺点,现可将SPR技术应用于微生物检测中。
2、毒品检测
常见毒品均是小分子化合物,我国最常见的毒品类型主要有冰毒、氯胺酮及海洛因。为了控制毒品的滥用,开发有效、快速的检测方法及其重要。目前SPR技术已经能够对大多数毒品分子进行检测。
3、爆炸物成分检测
爆炸物通常被用于个人犯罪和恐怖袭击,严重威胁着人民群众的生命和财产安全。实现对爆炸物有效成分的快检能有力打击涉爆犯罪,如公共交通中可疑爆炸物的检测,以及事故现场痕量爆炸物成分的鉴定。目前SPR传感器对爆炸物检测主要集中在DNT(二硝基甲苯)、TNP(2,4,6-三硝基苯酚)、TNT(2,4,6-三硝基甲苯)和RDX(三亚甲基三硝胺)。
4、食品安全
检测食品中的毒物残留是食品安全领域的一项重要任务。目前SPR技术可对食品中的杀虫剂、除草剂、生物毒素和环境污染物等进行检测。
