MST是一种表征生物分子特性的光学方法，是粒子在微观温度梯度中的定向运动。将其中一个互作分子(大多是蛋白)标记荧光染料或者融合GFP标签，将标记蛋白和配体分子按照特定的浓度梯度置于毛细管中，红外激光加热产生一个微观的温度梯度场发生热泳动，其水化层、分子大小、电荷等分子性质会随着热泳动发生改变，进而引起反应体系中荧光分布的变化。

MST仪器通过记录激光器打开前、打开期间和打开后处于温度梯度中的样品内部红外激光照射区域的荧光变化情况，从而实现较短时间的测定。MST除了能精确检测生物分子间相互作用，通过计算解离常数(Kds)，还能得到有关生物分子互作的其他参数，实现精确的定性分析。

1、优点：

①检测下限低，弱分子力首选;

②需固定样品，且样品用量较小，ug级别就能开展检测;

③无需使用抗体，无需获得高纯度蛋白，直接使用Tris-NTA dye标记His-Tag融合蛋白，即可上机进行检测;

④能够测量复杂生物溶液(细胞裂解物、血清、洗涤剂、脂质体等);

⑤相互作用物尺寸范围广;

⑥不仅能定性两个生物分子的互作关系，还可以定量判断结合的亲和力强弱。

2、缺点：

①需要内部荧光或荧光标记(受标记效率、特异性和荧光猝灭的影响);

②无动力学信息(即缔合率和解离率)和浓度分析;

③若互作蛋白与其他分子形成复合体或者于其他分子存在竞争，会影响结合数据;

④若蛋白存在翻译后的修饰，不同体系检测的数据会发生漂移;

⑤若待测蛋白在实验体系中稳定性不佳，会影响数据的稳定性。

1、蛋白-小分子相互作用分析(蛋白酶与抑制剂、细胞膜蛋白活性)

2、蛋白-蛋白相互作用分析(包括抗原-抗体、分子伴侣-底物)

3、蛋白-肽相互作用分析

4、肽-肽相互作用分析

5、蛋白-核酸相互作用分析

6、核酸-核酸相互作用分析

7、核酸适配子-小分子相互作用分析