以常用的 96 孔板、CCK-8/MTT 等比色法为例,每孔接种量不是固定值,需要先做预实验;但有一个比较通用的参考范围。
96 孔板每孔接种量参考
细胞增殖实验
一般每孔接种 1,000–2,000 个细胞,培养体积按 100 μL/孔计。
如果检测时间较长,比如 48–72 小时,且细胞增殖较快,起始接种量可以更低;如果检测时间短,比如 24 小时内就要读数,可以适当提高。
细胞毒性实验
一般每孔接种 5,000–10,000 个细胞,同样按 100 μL/孔计。
毒性实验通常希望对照组在终点时有足够信号,同时实验组能清楚体现抑制效应,所以接种量会比增殖实验高一些。
贴壁细胞
每孔至少接种 1,000 个细胞,低于这个量信号可能偏弱。
悬浮细胞/白细胞
由于显色灵敏度较低,建议每孔不低于 2,500 个细胞;部分白细胞体系甚至需要更高接种量或延长显色时间。
上限建议
96 孔板每孔一般不建议超过 25,000 个细胞,否则容易超出线性范围或出现接触抑制。
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