ITC/SPR/BLI/MST 该如何选型？

　　先按研究目标来选

　　SPR擅长回答“结合有多快、解离有多慢、亲和力多强”，适合抗体、小分子、蛋白的精细动力学表征，也是候选分子确证和监管接受度较高的无标记动力学检测手段。

　　BLI适合快速获得亲和力与近似动力学，做批量比较。抗体筛选、表位分组、粗样或上清快速检测、早期候选分子排序都很合适。

　　MST的优势是样品用量少、对难纯化样品友好，膜蛋白、裂解液、复杂缓冲液体系下也能测KD。适合珍贵蛋白、膜蛋白、小分子/多肽/核酸结合验证，以及溶液相快速亲和力筛查。

　　ITC是唯一能直接给出完整热力学参数的技术，可以拿到KD、n、ΔH、ΔS、ΔG，判断结合是焓驱动还是熵驱动，也能确认化学计量比。但样品消耗大、通量低，不适合大批量初筛。

　　按样品条件来选

　　样品量少、难纯化的情况优先MST。单点消耗极低，溶液相检测，缓冲液兼容性好，甚至可用细胞裂解液或含去垢剂体系。但通常需要荧光标记其中一个分子，强荧光、有色、高浊度体系会干扰。

　　需要精细动力学优先SPR。能实时监测结合与解离，给出较可靠的ka/kd/KD，适合需要“结合快慢、停留时间、解离速率”的场景。局限是需要固定配体，存在固定取向、非特异性吸附和芯片再生优化等问题。

　　要高通量、快速比较多个候选分子优先BLI。浸入式检测无需微流路，操作简便，适合96孔/384孔板并行，也更适合抗体上清和粗样品。动力学精度通常略低于SPR，但做快速排序和初筛效率很高。

　　要完整热力学参数只能选ITC。可直接获得ΔH、ΔS、n，解释结合驱动力，但通量低。

　　常见组合策略

　　早期筛选用BLI或MST快速筛KD和活性排序;候选确证用SPR精细测定ka/kd/KD;机制解析用ITC补充热力学参数;膜蛋白或难纯化靶点优先MST，若需要动力学再考虑优化固定策略做SPR/BLI。

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