BLI 生物膜干涉技术流程

　　生物膜干涉技术(Bio-Layer Interferometry, BLI)是一种无标记、实时、高通量的分子相互作用分析技术，广泛用于测定蛋白-蛋白、蛋白-小分子、抗体-抗原、受体-配体等生物分子间的结合动力学(ka、kd)和亲和力(KD)。其核心原理是通过检测生物传感器尖端薄膜上光干涉信号的变化，反映分子结合引起的光学厚度变化。

　　标准 BLI 实验流程(5 步法)

　　Step 1：基线平衡(Baseline)

　　将传感器浸入 缓冲液 中

　　时间：60–120 秒

　　目的：稳定干涉信号，消除环境波动

　　Step 2：配体装载(Loading)

　　将传感器浸入 配体溶液(如 1–10 μg/mL 抗体)

　　时间：60–300 秒(至信号 plateau)

　　目标响应值(Loading level)：

　　抗体-抗原：0.5–2.0 nm

　　小分子：0.1–0.5 nm(避免质量传输限制)

　　注意：避免过载(>5 nm 可能导致空间位阻)

　　Step 3：基线2(Baseline 2)

　　回缓冲液中平衡

　　时间：60 秒

　　目的：洗去未结合配体，稳定背景

　　Step 4：结合(Association)

　　将传感器浸入 不同浓度分析物溶液(如 0.1, 0.5, 1, 5, 10 μM)

　　时间：60–600 秒(根据结合速度调整)

　　关键：设置 零浓度对照(缓冲液)用于扣除本底

　　Step 5：解离(Dissociation)

　　回缓冲液中监测解离

　　时间：120–1800 秒(慢解离需更长)

　　目的：获取 kd(解离速率常数)

　　可选 Step 6：再生(Regeneration)

　　浸入再生液 10–60 秒，去除结合的分析物

　　再次测基线，确认传感器可重复使用(通常 3–10 次)

       来源：网络