Octet分子互作分析技术原理及标准实验流程

　　Octet分子互作分析系统(由赛多利斯 Sartorius 开发)是目前生物制药研发和基础研究中广泛使用的无标记分子互作分析平台。它的技术是生物层干涉技术(BLI, Bio-Layer Interferometry)。

　　其技术原理、应用优势以及针对非特异性结合(NSB)的专属优化策略：

　　1. 技术原理

　　Octet系统利用一次性光纤生物传感器(Biosensor)进行检测。当一束白光照射到传感器时，一部分光在内部反射层反射，另一部分在表面生物膜反射，两束光发生干涉形成特征光谱。

　　当分子结合到传感器表面时，生物层厚度增加，导致光路长度改变，干涉光谱发生位移。系统通过实时监测这种光谱位移(以纳米 nm 为单位)，即可计算出分子结合的动力学参数(Kon、Koff)和亲和力(KD)。

　　2. 标准实验流程

　　一个典型的Octet动力学测定流程包括四个步骤：

　　基线建立(Baseline)：将传感器浸入缓冲液中，获取初始干涉光谱作为基线。

　　分子加载(Loading)：将传感器浸入配体(Ligand，如抗体)溶液中，使其固化到传感器表面。

　　结合反应(Association)：将传感器转移至含有分析物(Analyte，如抗原)的溶液中，实时监测结合引起的信号增加。

　　解离监测(Dissociation)：将传感器移回缓冲液中，监测复合物的解离及信号下降。

　　3. 平台优势

　　高通量与并行处理：一台仪器可同时运行8、16、32甚至96个通道(如Octet RED384支持384通道)，非常适合抗体库的初步筛选、表位分型和命中验证。

　　无标记检测：样品无需荧光或同位素标记，避免了标记过程对分子性质的改变，特别适合高价值样品的研究。

　　操作简便且样品消耗低：无需复杂的微流控管路，对样品通透性要求低，每个样品通常仅需微量(≥200 μL)。

　　4. 针对Octet的非特异性结合(NSB)排除策略

　　由于BLI技术是在固液界面进行反应，非特异性结合是常见挑战。针对Octet系统，建议采取以下专属优化方案：

　　使用特异性NSB阻断剂(Blockers)：

　　蔗糖(Sucrose)：z新研究表明，对于弱相互作用(需要高浓度分析物)的研究，蔗糖是极佳的NSB阻断剂，且与生物分子高度兼容。

　　常规添加剂：在缓冲液中加入BSA(牛血清白蛋白)或 Tween-20 以降低疏水相互作用引起的背景噪音。

　　优化传感器选择与表面封闭：

　　根据配体特性选择合适的传感器(如Ni-NTA、Protein A、SAX等)。例如，若常规传感器NSB严重，可尝试更换为高精度链霉亲和素(SAX)传感器，并在加载后使用生物素(Biocytin)封闭残留位点。

　　使用专用的动力学缓冲液(如Octet® Kinetics Buffer)来维持体系稳定。

　　调整分析物浓度与双重参考法：

　　非特异性信号与分析物浓度成正比。如果高浓度下NSB显著，应尝试降低分析物的z高测试浓度。

　　必须设置**无配体传感器(Reference Sensor)**进行双重参考(Double-referencing)扣除，以消除系统漂移和非特异性吸附的背景信号。

　　实验设计(DOE)筛选：

　　可利用实验设计软件(如MODDE®)系统性地筛选缓冲液成分、盐浓度和封闭剂组合，以找到抑制NSB的z佳条件。

       来源：网络