WB 实验周期与样品用量是多少？

　　常规 WB 代测，实验周期多为 1–3 周;样品用量要看送的是组织、细胞还是已提取蛋白。一般建议：

　　组织：每样 100–200 mg，低丰度蛋白、膜蛋白、核蛋白建议 ≥200 mg。

　　细胞：每样 1×10⁷ 个左右;若由代测方提取蛋白，建议 1×10⁷–2×10⁷ 个。

　　已提取蛋白：每样总蛋白量 ≥200–500 μg，浓度z好 ≥1 mg/mL，体积 ≥50–100 μL。

　　血清/血浆：每样 ≥50–100 μL，避免溶血、脂血。

　　实验周期

　　WB 代测周期通常按环节累加：

　　仅做 WB 检测：约 5–15 个工作日。

　　含蛋白提取：约 1–2 周。

　　含预实验：需先摸索抗体稀释度、上样量、阳性对照，整体约 2–3 周。

　　正式实验 + 灰度分析：通常再加 1 周左右。

　　多指标、多膜、多分组：周期会延长，可能到 2–4 周。

　　如果样品需要特殊前处理，比如膜蛋白、核蛋白、磷酸化蛋白、低丰度蛋白，周期通常会比常规 WB 更长。

　　上样量参考

　　WB 每泳道上样量通常按蛋白丰度调整：

　　高丰度蛋白：5–10 μg 总蛋白。

　　常规胞浆蛋白：20–30 μg 总蛋白。

　　低丰度蛋白、膜蛋白、核蛋白：30–50 μg，必要时更高。

　　组织匀浆：15–25 μg 较常见。

　　细胞裂解液：20–30 μg 较常见。

　　所以送样时不能只按“每泳道 20–30 μg”算，还要预留定量、预实验、复孔、复测和阳性对照的量。

　　送样与保存

　　组织取样后尽快清洗血污，液氮速冻或 -80℃ 保存。

　　细胞沉淀 PBS 清洗后离心收集，避免残留培养基。

　　全程干冰运输，避免反复冻融。

　　若送已提取蛋白，需注明裂解液成分、蛋白浓度、是否已加 Loading Buffer。

　　一抗尽量提供说明书、货号、稀释比例、适用物种和实验方法。

　　如果你要对外发布代测页面，可以写成“常规 WB 10–15 个工作日，含提取约 2–3 周;组织 ≥100 mg/样，细胞 ≥1×10⁷/样，已提蛋白 ≥200 μg/样”，这样客户一眼能判断是否满足送样条件。

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