WB、qPCR、ELISA
是分子蛋白检测中常用的三类实验，也是科研代测服务中咨询量z高的项目。由于样本类型多、保存条件严、质控环节细，送样前做好规范准备，能大幅降低返工和数据异常风险。下面按实验类型分别说明送样要求与关键注意事项。
一、WB 实验代测
样本类型与送样量
细胞样本：细胞沉淀建议 ≥1×10⁷ 个，或细胞裂解液总蛋白量 ≥500 μg/样，蛋白浓度建议 ≥1 mg/mL。
组织样本：新鲜组织建议 ≥30–100 mg，蛋白浓度建议 ≥10–15 mg/mL。
血清/血浆：血清、血浆更适合做 ELISA;若做 WB，血液成分复杂，可能出现条带异常或内参不一致。
膜蛋白、核蛋白、线粒体蛋白：样本量通常需翻倍，组织建议 ≥100 mg，细胞沉淀量适当增加。
保存与运输
组织、细胞沉淀、蛋白裂解液建议 -80℃ 保存，避免 -20℃ 长期存放。
全程 干冰运输，避免反复冻融。
若送已提取蛋白，建议加入 Loading Buffer 并变性后干冰寄送;也可送新鲜样本由代测方统一提取蛋白，减少批次差异。
抗体与对照
一抗建议由客户提供，需提供抗体说明书、种属、稀释比例、适用实验方法等信息。
建议提供 阳性对照样本，便于判断无信号是样本问题还是抗体问题。
内参如 β-actin、GAPDH、β-tubulin 通常可由代测方提供;若检测膜蛋白、核蛋白，需确认对应内参。
关键注意事项
组织取材后应尽快清洗血污、液氮速冻或干冰速冻，避免蛋白降解。
裂解液需加入蛋白酶抑制剂，PMSF 现用现加。
上样前必须做蛋白定量，保证等蛋白量上样，常规每泳道 20–30 μg。
若目标蛋白表达量低、分子量特殊或需检测磷酸化蛋白，建议提前说明。
二、qPCR 实验代测
样本类型与送样量
gDNA：体积 ≥10 μL，浓度 ≥50 ng/μL，条带清晰、无明显降解。
RNA：体积 ≥10 μL，浓度 ≥50 ng/μL，建议提供 RNA 完整性信息。
细胞样本：建议 ≥10⁶ 个细胞，可送细胞沉淀或细胞悬液。
组织样本：建议 ≥100 mg。
保存与运输
RNA 样本对 RNase 和温度非常敏感，建议液氮速冻后 -80℃ 保存，干冰运输。
若送已提取 RNA，需确认无 RNase 污染，管壁密封良好。
已反转录的 cDNA 可 -20℃ 或 -80℃ 保存，干冰或冰袋运输视距离而定。
需提前提供的信息
检测物种。
检测基因名称、CDS 序列或引物序列。
是否需要代测方设计引物。
是否做绝对定量、相对定量或 miRNA 检测。
内参基因选择，如 GAPDH、β-actin、18S rRNA 等。
关键注意事项
RNA 样本避免反复冻融，运输时尽量缩短室温暴露时间。
若样本含高脂、多糖、多酚或血液成分，需提前说明，可能影响 RNA 提取质量。
相对定量实验建议提供明确分组信息，便于后续 2⁻ΔΔCt 分析。
三、ELISA 实验代测
常见样本类型
血清、血浆
细胞培养上清
组织匀浆上清
细胞裂解液
尿液、脑脊液、胸腹水等体液
样本处理要点
血清：室温静置 1–2 小时或 4℃ 过夜促凝后离心取上清，避免溶血、脂血。
血浆：使用 EDTA、肝素钠或枸橼酸钠抗凝，采血后尽快离心取上清;需确认抗凝剂与试剂盒兼容。
细胞培养上清：离心去除细胞碎片，收集澄清上清。
组织匀浆：按重量体积比加入预冷 PBS 或裂解液，匀浆后离心取上清。
细胞裂解液：建议使用不含 SDS 或低浓度去垢剂的裂解液，避免干扰抗原抗体结合。
送样量建议
液体样本每孔通常需 50–100 μL，考虑复孔、复测和预实验稀释，建议每样本准备 ≥200–500 μL。
组织样本建议 ≥50 mg，具体视检测指标和是否需要 BCA 定量而定。
若目标蛋白表达量低，需适当增加样本量。
保存与运输
样本按单次用量分装，避免反复冻融，冻融超过 3 次可能影响结果。
短期保存可置于 2–8℃，长期保存建议 -20℃ 或 -80℃。
运输时液体样本通常采用干冰或冰袋运输，具体依样本类型和距离确定。
关键注意事项
溶血样本可能导致 HRP 体系背景升高，应尽量避免。
样本中若含叠氮钠，可能抑制 HRP 活性，需提前确认。
浓度未知样本建议预留足够体积，用于预实验确定稀释倍数。
送样时需注明检测指标、物种、是否做复孔、是否需要标准曲线和浓度计算。
四、通用送样清单
样本编号清晰，管壁标记与送样清单一致。
提供样本类型、物种、组织部位、细胞系名称。
说明保存条件、冻融次数、是否已裂解或已提取。
WB 需提供一抗信息、内参要求、是否需灰度分析。
qPCR 需提供基因信息、引物序列、定量方式。
ELISA 需提供检测指标、试剂盒品牌或是否由代测方提供。
预留备份样本，便于复测或补充实验。
来源：网络
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更新时间：2026-10-10