冷冻透射电镜 Cryo-TEM 适用样品类型与送样要求

　　Cryo-TEM 主要适合分散态、水相/弱有机相、电子束敏感、空气敏感、需要保持近原生状态的样品。典型包括：蛋白/病毒/外泌体/脂质体等生物悬浮液，聚合物胶束、纳米晶、MOF/COF、钙钛矿、凝胶、乳液等软物质，以及锂/钠金属、SEI/CEI、固态电池界面等空气敏感材料。

　　适用样品类型

　　1. 生物大分子与颗粒悬浮液

　　可溶蛋白、蛋白复合物、病毒、外泌体、脂质体、细胞器。

　　适合单颗粒分析、形貌观察、粒径分布、聚集状态评估。

　　蛋白浓度通常建议 ≥1 mg/mL，体积至少 20–50 μL;外泌体/脂质体常以颗粒数计，浓度越高、单分散性越好，制样成功率越高。

　　2. 软物质与纳米材料分散液

　　聚合物胶束、囊泡、水凝胶前驱体、纳米晶、纳米颗粒、乳液。

　　要求样品能形成稳定分散液，浓度比常规 TEM 观察浓度更高，通常需要平台预评估。

　　3. 空气敏感/束敏感材料

　　锂/钠金属、枝晶、SEI/CEI、固态电解质界面、钙钛矿、MOF 等。

　　关键不是“样品本身必须含水”，而是制样、转移和成像全程低温、低剂量、必要时惰性气体保护。

　　4. 厚样品与块体界面

　　完整细胞、组织、厚电极、块状固态电解质不能直接进 Cryo-TEM。

　　通常需高压冷冻后做 cryo-FIB 减薄，制成约 100–300 nm 的电子透明薄片。

　　送样通用要求

　　样品状态

　　悬浮液/溶液：一般 20–200 μL，装入 1.5 mL 离心管，封口膜密封。

　　粉末：通常 5–10 mg，粒径z好 <1 μm，便于重新分散。

　　薄膜/块体：不能直接拍摄，需提前确认是否可做 cryo-FIB、包埋切片或离子减薄。

　　溶剂与缓冲液

　　水相样品优先使用低盐缓冲液，如 Tris、PBS、HEPES;总盐浓度建议 <150 mM，越低越有利于玻璃化冷冻和成像对比度。

　　避免高浓度甘油、蔗糖、DMSO 等冷冻保护剂;它们会提高背景、干扰玻璃化，并可能改变样品天然构象。

　　含有机溶剂的样品需提前告知平台，通常有机相比例越低越好，部分平台要求 <5%。

　　浓度与分散性

　　样品应单分散、无明显沉淀、无强团聚。

　　浓度过低会导致颗粒稀疏，过高会导致重叠、冰层过厚或 blotting 失败。

　　建议随样提供溶剂，便于平台现场稀释优化。

　　安全性与稳定性

　　不接收挥发性、有毒、强腐蚀性、强磁性、放射性样品;磁性样品需提前沟通并消磁。

　　病毒类样品需提供灭活证明。

　　样品在液氮温区应稳定，不能反复冻融。

　　寄送与保存

　　液体样品通常干冰寄送;粉末样品视体系决定是否需要干冰或惰性气氛包装。

　　空气敏感材料建议使用手套箱封装、密封罐或惰性气体保护转移。

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