WST-1细胞增殖检测流程

　　WST-1(Water Soluble Tetrazolium salt-1)检测是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性分析的比色法技术。

　　简单来说，它通过检测活细胞线粒体脱氢酶的活性，来反映细胞的数量和活力。与传统的MTT法相比，WST-1 z大的优势在于其生成的产物是水溶性的，无需溶解步骤，操作更便捷，灵敏度也更高。

　　检测原理

　　WST-1是一种类似于MTT的四唑盐化合物。在电子耦合试剂(Electron Coupling Reagent)存在的情况下，WST-1会被活细胞线粒体内的脱氢酶还原，生成橙黄色的水溶性甲臜(Formazan)染料。

　　正相关：生成的甲臜染料量与活细胞的数量成正比。

　　检测方式：细胞增殖越快、数量越多，颜色越深;细胞毒性越大、死细胞越多，颜色越浅。

　　测定波长：通常使用酶标仪在 450 nm 波长处测定吸光度(OD值)，参考波长通常为 600-690 nm。

　　标准操作流程

　　WST-1检测通常在96孔板中进行，以下是通用的操作步骤(具体需参考试剂盒说明书)：

　　细胞接种：

　　将细胞悬液接种到96孔板中(通常每孔100 µL，细胞数根据生长速度调整为2000-10000个/孔)。

　　在培养箱中预培养，使细胞贴壁。

　　加药处理：

　　根据实验设计，加入不同浓度的药物或刺激因子，继续培养一定时间。

　　加入WST-1试剂：

　　每孔加入 10 µL WST-1溶液(若培养体积为200 µL，则加20 µL)。

　　注意：试剂应直接加入培养基中，无需更换培养基。

　　孵育显色：

　　在细胞培养箱中继续孵育 0.5 - 4 小时。

　　提示：初次实验建议在0.5、1、2、4小时分别读数，找到OD值在0.8-1.5左右的z佳时间点。

　　测定读数：

　　将96孔板在摇床上震荡1分钟混匀。

　　使用酶标仪测定450 nm处的吸光度。

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