微量热泳技术的应用

　　微量热泳技术(MicroScale Thermophoresis, MST)是一种高灵敏度、低样品消耗、溶液相的生物分子相互作用分析技术，特别适用于难固定、膜蛋白、小分子药物、核酸、离子等体系的亲和力测定。其核心优势在于无需固定、抗干扰强、适用缓冲液范围广。

　　MST 的核心应用领域

　　1. 小分子-靶蛋白亲和力测定(药物筛选)

　　优势：

　　耐受 ≤10% DMSO(SPR/BLI 通常 ≤1%)

　　可测 弱亲和力(KD = nM – mM)

　　案例：

　　激酶抑制剂与 ATP 竞争结合

　　GPCR 配体筛选(需纳米盘或去垢剂 solubilized)

　　2. 蛋白质-蛋白质/核酸相互作用

　　适用体系：

　　转录因子-DNA/RNA

　　抗体-抗原(尤其难固定抗原)

　　多亚基复合物组装

　　标记策略：

　　荧光染料(NT-647 NHS)标记赖氨酸

　　His-tag + anti-His 荧光抗体(免纯化)

　　3. 离子/辅因子结合研究

　　独特优势：

　　直接在 生理离子强度 下测量

　　可测 Ca²⁺、Zn²⁺、ATP、cAMP 等与蛋白结合

　　示例：

　　钙调蛋白(Calmodulin)与 Ca²⁺ 的协同结合

　　4. 膜蛋白与脂质/药物互作

　　样品形式：

　　去垢剂胶束(DDM, OG)

　　脂质体、纳米盘(Nanodiscs)

　　SMA 脂质颗粒(SMALPs)

　　避免固定导致的失活

　　5. 血清/细胞裂解液中的直接结合

　　突破性应用：

　　在 10–50% 血清 中测药物-蛋白结合(如 HSA 结合率)

　　无需纯化，减少假阴性

       来源：网络