ITC与SPR 的分子要求有什么不同

　　ITC(等温滴定量热法)和 SPR(表面等离子体共振)虽均为无标记分子互作技术，但因检测原理不同，对分子类型、大小、溶解性及结合特性的适用性存在显著差异。

　　关键限制因素详解

　　ITC 的分子要求

　　结合热信号足够强：

　　小分子(<200 Da)ΔH 通常 <1 kcal/mol → 需极高浓度(可能超溶解度)

　　经验法则：小分子分子量 >300 Da 更适合 ITC

　　溶液相行为良好：

　　不能有聚集、沉淀(否则热信号失真)

　　膜蛋白需 solubilized in detergent(但 detergent 稀释热干扰大)

　　缓冲液兼容性：

　　避免 Tris(质子化热干扰)→ 推荐磷酸盐、HEPES

　　ITC 适合：

　　中等亲和力(KD = 10 nM – 100 μM)

　　放热/吸热明显的体系(如氢键、疏水作用)

　　SPR 的分子要求

　　至少一方可固定：

　　小分子常作为分析物注入(避免固定导致活性丧失)

　　蛋白/抗体可捕获(Protein A 芯片)或共价偶联

　　分子量影响灵敏度：

　　小分子(<200 Da)响应值低(<10 RU)→ 需高灵敏度仪器(如 Biacore 8K)

　　大分子(>10 kDa)信号强，易检测

　　非特异吸附控制：

　　脂质、多糖易粘附芯片 → 需优化封闭条件(如 BSA + Tween-20)

　　SPR 适合：

　　动力学研究(kon, koff)

　　低丰度样品(μg 级)

　　高通量筛选

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