蛋白热稳定性方法有哪些？

　　表面等离子体光谱(Surface Plasmon Spectroscopy)通常指基于表面等离子体共振(Surface Plasmon Resonance, SPR)原理的光学检测技术，是研究分子间相互作用(如蛋白-蛋白、药物-靶点、抗原-抗体)的金标准方法之一。它具有无标记、实时、高灵敏度、可定量动力学参数等优势。

　　重点方法详解

　　1. nanoDSF(纳米差示扫描荧光法)— 当前主流

　　原理：

　　蛋白去折叠 → 色氨酸从内部暴露 → 350 nm / 330 nm 荧光强度比值(Ratio)突变

　　输出：

　　Tm(主转变)

　　Tagg(聚集起始温度，可选)

　　设备：Prometheus(NanoTemper)、UNcle(UNIte)

　　优点：

　　无需染料，避免假阳性

　　仅需 10 μL，兼容高盐/去垢剂

　　可测膜蛋白、抗体、病毒样颗粒

　　典型曲线：

　　(示意图：Ratio vs Temperature，拐点即 Tm)

　　2. Thermal Shift Assay(TSA，又称 DSF)

　　原理：

　　使用疏水染料(如 SYPRO Orange)→ 结合去折叠蛋白 → 荧光增强

　　操作：

　　蛋白 + 染料 + 缓冲液梯度 → 25–95°C 升温 → 实时测荧光(Ex 470 nm / Em 570 nm)

　　设备：qPCR 仪(如 Bio-Rad CFX, QuantStudio)

　　优点：成本极低(利用现有 qPCR 仪)

　　缺点：

　　染料可能干扰蛋白(尤其膜蛋白)

　　缓冲液成分限制(甘油、Tris 干扰荧光)

　　3. DSC(差示扫描量热法)— 金标准

　　原理：直接测量蛋白溶液 vs 参比池的热流差

　　输出：

　　Tm

　　ΔH(焓变，反映结构域数量)

　　ΔCp(热容变化)

　　设备：TA Instruments Nano DSC、Malvern VP-Capillary DSC

　　适用：生物药申报、高精度热力学研究

       来源：网络