SPR 实验设计关键：如何固定肝素钠？

　　肝素钠(Heparin Sodium)是一种高度硫酸化的糖胺聚糖(GAG)，具有强负电荷，广泛用于抗凝治疗。利用表面等离子共振(SPR)技术检测肝素钠与其结合蛋白(如抗凝血酶 III, ATIII;血小板因子 4, PF4;生长因子等)形成的复合物相互作用，是研究其结合动力学、亲和力及抗凝机制的重要手段。

　　肝素钠是线性多糖、无特异性固定基团，且带强负电荷，直接胺基偶联效果差。推荐以下策略：

　　方案 1：链霉亲和素-生物素化肝素(优选)

　　生物素化肝素：

　　使用 NHS-PEG₄-Biotin 修饰肝素的还原端氨基(需控制取代度 ≤1，避免影响结合位点)

　　芯片选择：SA 芯片(Streptavidin Sensor Chip)

　　固定步骤：

　　注入生物素化肝素(1–10 μg/mL in HBS-EP+)

　　响应值控制在 50–200 RU(避免空间位阻)

　　优点：

　　定向固定，保持肝素活性构象

　　再生温和(可重复使用)

　　方案 2：脂质体捕获法(适用于膜相关研究)

　　将肝素嵌入带正电荷脂质体(如 DOTAP)

　　用 L1 芯片捕获脂质体

　　适合模拟细胞表面肝素蛋白聚糖(HSPG)环境

　　方案 3：直接胺基偶联(不推荐，仅作备选)

　　肝素溶于低 pH 缓冲液(如 10 mM acetate, pH 4.0)

　　用 EDC/NHS 活化 CM5 芯片，偶联肝素

　　缺点：随机固定，部分结合位点被掩蔽;再生困难

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