滤纸片法测抑菌圈

　　滤纸片法测抑菌圈(又称纸片扩散法，Kirby-Bauer 法)是一种经典的定性或半定量体外抗菌活性检测方法，广泛应用于抗生素药敏试验、天然产物抗菌筛选、消毒剂效力评估等领域。

　　标准操作步骤(CLSI M02-A12 推荐)

　　1. 菌液制备

　　挑取单菌落，接种于液体培养基(如 MH broth)，37℃振荡培养 4–6 h(对数生长期);

　　用生理盐水调整菌液浓度至 0.5 麦氏浊度(≈ 1–2 × 10⁸ CFU/mL)。

　　2. 涂布平板

　　用无菌棉签蘸取菌液，均匀涂布于 MHA 平板表面;

　　重复 3 次，每次旋转 60°，确保全覆盖;

　　室温静置 5–10 分钟，使菌液吸收。

　　3. 贴滤纸片

　　用无菌镊子夹取滤纸片，浸入待测样品溶液(或直接滴加 10–20 μL 样品于干纸片上);

　　轻压纸片使其紧贴琼脂表面;

　　每板可贴 4–6 片，间距 ≥24 mm(避免抑菌圈重叠);

　　同时设置：

　　阳性对照：已知抗生素(如氨苄西林、庆大霉素);

　　阴性对照：溶剂(如无菌水、DMSO、乙醇)。

　　4. 培养

　　37℃ 倒置培养 16–18 小时(快速生长菌);

　　某些慢生菌(如 Pseudomonas)可延长至 24 h。

　　5. 结果观察与测量

　　观察是否有清晰、圆形抑菌圈;

　　用游标卡尺或专用量尺测量抑菌圈直径(含纸片直径，单位：mm);

　　记录结果，重复 3 次取平均值。

       来源：网络