mtt法检测细胞活性操作步骤

　　MTT 法检测细胞活性是一种经典的比色法(colorimetric assay)，通过测量活细胞线粒体脱氢酶将黄色 MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)还原为不溶性紫色甲臜(formazan)的能力，间接反映活细胞数量与代谢活性。广泛应用于药物筛选、细胞毒性、生物材料相容性等研究。

　　标准操作步骤(以贴壁细胞为例)

　　1. 细胞接种

　　消化、计数，调整浓度(通常 5×10³–1×10⁴ cells/孔，96 孔板);

　　每孔加 100 μL 细胞悬液，设：

　　实验组(加药物/处理);

　　空白对照(只加培养基 + MTT，无细胞);

　　阴性对照(正常细胞，不加药物);

　　阳性对照(如 10 μM 阿霉素，诱导死亡);

　　每组 ≥3 复孔。

　　2. 药物处理

　　细胞贴壁后(通常 24 h)，更换含不同浓度药物的新鲜培养基;

　　继续培养 24–72 h(依实验设计)。

　　3. 加 MTT

　　每孔加入 10–20 μL MTT 溶液(终浓度 0.5 mg/mL);

　　37℃、5% CO₂ 培养 2–4 h(避光!);

　　显微镜下观察：活细胞内出现紫色颗粒。

　　4. 溶解甲臜

　　小心吸弃上清(避免吸走沉淀);

　　每孔加 100–150 μL DMSO(或酸化异丙醇);

　　振荡 10–15 min 至紫色完全溶解(避光)。

　　5. 测 OD 值

　　酶标仪测 490 nm(主波长)，630 nm(参比波长，扣除背景);

　　计算：校正 OD = OD₄₉₀ – OD₆₃₀。

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