抗菌活性抑菌圈实验步骤

　　抗菌活性抑菌圈实验(Agar Diffusion Test / Kirby-Bauer Method)是评估抗菌物质(如抗生素、抗菌肽、纳米材料、植物提取物等)对细菌或真菌抑制能力的经典、直观且广泛应用的体外方法。其核心原理是：抗菌物质在琼脂培养基中扩散，形成浓度梯度，抑制敏感微生物生长，从而在菌苔上形成透明抑菌圈(Zone of Inhibition)。

　　实验步骤

　　制备菌悬液：挑取单菌落，接种于液体培养基，37°C 振荡培养至对数期

　　用生理盐水调整浓度至 0.5 麦氏浊度(≈ 1–2 × 10⁸ CFU/mL)

　　涂布平板：用无菌棉签蘸取菌液，均匀涂布于 MHA 平板(重复3次，旋转60°)

　　室温静置 5–10 分钟，使菌液吸收

　　加样：纸片法：用无菌镊子将浸有样品的滤纸片贴于平板(轻压确保接触)

　　打孔法：用灭菌打孔器在琼脂上打孔(直径 6–8 mm)，加入 50–100 μL 样品

　　牛津杯法：放置不锈钢小杯，注入样品溶液

　　扩散与培养：预扩散(可选)：4°C 放置 1–2 h，促进扩散(尤其对大分子)

　　倒置培养：37°C(细菌)或 28–30°C(真菌)培养 16–24 h

　　测量抑菌圈：用游标卡尺或自动菌落计数仪测量抑菌圈直径(含纸片/孔径)

　　单位：毫米(mm)

　　每个样品至少 3 个重复

       来源：网络