tunel法检测组织凋亡实验流程

　　1. 样本准备

　　组织固定：4% 多聚甲醛(PFA)，避免过度固定(≤24 h);

　　石蜡包埋或 OCT 包埋(冰冻切片);

　　切片厚度：4–6 μm。

　　2. 脱蜡与水化(石蜡切片)

　　二甲苯脱蜡 → 梯度乙醇水化 → PBS 洗涤。

　　3. 抗原修复(可选但推荐)

　　柠檬酸钠缓冲液(pH 6.0)或 EDTA(pH 8.0)，微波或高压修复 10–20 min;

　　冷却后 PBS 洗 3×5 min。

　　4. 通透处理

　　蛋白酶 K(20 μg/mL，37°C，10–30 min)

　　或

　　0.1–0.5% Triton X-100(室温，10–15 min);

　　PBS 洗净。

　　蛋白酶 K 浓度和时间需优化，过度消化会导致组织脱落。

　　5. TUNEL 反应

　　按试剂盒说明书配制 TUNEL 反应液(含 TdT 酶 + 标记 dUTP);

　　滴加于切片，37°C 避光孵育 60 min;

　　PBS 洗涤 3×5 min。

　　6. 信号检测

　　根据标记类型选择：

　　7. 复染与封片

　　DAPI 复染细胞核(蓝色，区分总细胞);

　　抗荧光淬灭封片剂封片(荧光法);

　　中性树胶封片(显色法)。

       来源：网络