医学科研实验外包公司：免疫荧光实验具体如何操作呢？

　　免疫荧光实验是一种用于研究生物学中抗原-抗体反应的应用技术，它是将荧光色素标记到抗体或抗原上，以便在荧光显微镜下观察它们与其他相应抗原或抗体的特异性结合情况，下面就和医学科研实验外包公司e测试一起看看这个免疫荧光实验具体应该如何操作吧!

　　免疫荧光实验操作步骤如下：

　　1、细胞准备

　　(1)取出生长状态良好的细胞，弃培养基，消化重悬细胞。

　　(2)将24孔圆形爬片放入24孔板的孔中。

　　(3)根据细胞生长特性取适量细胞于已铺爬片的24孔板中，放入37℃孵箱培养。

　　2、固定

　　固定的目的，其实就是为了防止离体组织自溶抗原扩散。

　　(1)取出细胞，弃去培养基，用PBS洗细胞3次。

　　(2)每孔加入1mL的4%多聚甲醛，室温固定10-20min，弃去多聚甲醛;

　　(3)加入1mL的PBS清洗细胞，重复两次。

　　3、通透

　　其目的是使抗体进入胞内。

　　(1)每孔加入1mL的0.5% Triton-X100 ，室温10min，弃去Triton-X100。

　　(2)加入1mL的PBS清洗细胞，5min，弃PBS。重复两次。

　　4、封闭

　　每孔中加入1mL的3%BSA封闭液，室温封闭1h。弃封闭液。医学科研实验外包公司提醒：从封闭开始所有的步骤，一定要注意样品的保湿，避免样品的干燥，不然极易产生较高的背景。

　　5、一抗结合

　　(1)向爬片上滴加稀释好的一抗，用锡箔纸包住24孔板外面，轻柔的将24 孔板放置于4℃冰箱中，过夜孵育。

　　(2)加入1mL的PBS清洗细胞，5min，弃PBS。重复五次。

　　6、二抗结合

　　(1)加封闭液稀释的二抗室温避光孵育1h。

　　(2)加入1mL的PBS清洗细胞，5min，弃PBS。重复五次。

　　7、DAPI染色

　　(1)按照1：4000比例用1×PBS稀释DAPI工作液，并向每个孔中加入1mL的DAPI工作液，静置染色10min，e测试提醒：注意避光。

　　(2)加入1mL的PBS清洗细胞，5min，弃PBS。重复三次。

　　8、封片及检测

　　(1)将爬片小心取出，用吸水纸吸干多余液体，加5μl的抗荧光淬灭剂到载玻片上。

　　(2)将爬片倒置载玻片上，周围涂指甲油固定。

　　(3)4℃暂存或直接激光共聚焦显微镜拍摄。

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