WB蛋白免疫印迹:蛋白样品的制备

　　1)细胞总蛋白的提取：

　　①收集细胞，加入适量的预冷的PBS洗涤细胞，然后弃去洗液，重复上述步骤三次。收集细胞沉淀放置于冰上。

　　②向细胞沉淀种加入含有PMSF的100 μl裂解液，在冰上的裂解30分钟。在裂解过程中，要定期轻轻弹动以确保细胞充分裂解。

　　③收集裂解液到1.5 ml 离心管中，在4℃下进行12000 rpm离心5分钟。

　　④将离心后的上清分装至0.5 ml 离心管中，将样品于沸水中煮5 min使蛋白变性，迅速转移到-20℃保存。

　　(2)组织中总蛋白的提取：

　　①取少量组织块，使用清洁的剪刀将组织块彻底剪碎。

　　②向匀浆器中加入500 ul含有PMSF的裂解液，进行匀浆。随后将匀浆器置于冰上。

　　③5-10分钟后，再次进行碾磨，然后再次放置于冰上。这个过程需要重复几次，以确保组织块充分碾碎。

　　④裂解30分钟后，使用移液器将裂解液转移至1.5 ml 离心管中。随后，在4℃下进行12000 rpm离心5分钟，将上清液分装至0.5 ml 离心管中，将样品于沸水中煮5 min使蛋白变性，并存放于-20℃。

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