Wb蛋白免疫印迹的原理及两种方法的优缺点

　　一、简介

　　蛋白免疫印迹(Western Blot，简称WB)是一种能够从细胞或组织提取的复杂蛋白质混合物中检测靶蛋白并对其进行半定量的常用实验技术，还可以鉴定和定量蛋白质中翻译后修饰的氨基酸。与蛋白质科学中其他常用的分析技术(如ELISA、IHC、质谱法和显微镜观察等)相比，WB可提供有关蛋白质分子量信息，区分分子量相近的蛋白，适合检测低丰度蛋白和同时检测多个目的蛋白，并在蛋白质纯化或评估细胞中蛋白质表达水平时具有一定的优势。该方法广泛应用于分子生物学、生物化学、免疫遗传学等分子生物学领域。

　　二、原理

　　WB利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)，将抗体作为探针，标记的二抗作为显色工具，来分离指定样品中包含的各种蛋白质。将分离的蛋白质样品转移到固相载体(如硝酸纤维素或PVDF 膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。接下来，将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中，未结合的抗体被洗掉，只留下与目标蛋白质结合的抗体，最后通过显影胶片或荧光扫描来检测结合的抗体。

　　根据原理，蛋白免疫印迹可分为两种方法：直接法、间接法。

　　表1. 两种方法的优缺点

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