油红O染色的标准操作流程

　　油红O(Oil Red O)染色是检测细胞或组织内中性脂质(如甘油三酯)的经典方法。以下是适用于冰冻切片和细胞样本的通用标准操作流程(SOP)，结果判读为：脂滴呈红色/橙红色，细胞核呈蓝色。

　　试剂与材料准备

　　固定液：4% 多聚甲醛(PFA)

　　油红O储备液：0.5% 油红O异丙醇饱和溶液(或60%异丙醇配制)

　　油红O工作液：使用前将储备液与蒸馏水按 3:2 体积比混合，室温静置5-10分钟，必须用滤纸过滤后使用。

　　注意：工作液易产生沉淀，需在配制后60分钟内用完。

　　分化/洗涤液：60% 异丙醇(或50%乙醇)

　　复染液：Mayer's 苏木素染色液

　　封片剂：水性封片剂(如甘油明胶)，严禁使用中性树胶等有机溶剂封片剂

　　其他：PBS、蒸馏水、滤纸、避光容器

　　标准操作步骤

　　1. 样本固定

　　冰冻切片：切片回温5-10分钟，浸入4%多聚甲醛固定 10分钟，蒸馏水轻洗。

　　细胞样本：吸去培养基，PBS洗1次，加入4%多聚甲醛室温固定 10-60分钟(根据细胞类型调整)，PBS洗2-3次。

　　2. 前处理(增强渗透)

　　将样本浸入 60% 异丙醇 中，室温孵育 20秒 - 5分钟。

　　关键点：此步骤无需水洗，直接进行下一步染色。

　　3. 油红O染色

　　吸去异丙醇，加入足量过滤后的油红O工作液，确保完全覆盖样本。

　　室温避光染色 5-15分钟(肝/心组织建议5-10分钟，脂肪细胞或脂滴较少时可延长至15-30分钟)。

　　4. 分化与清洗

　　吸去染液，迅速用 60% 异丙醇 分化 5-20秒，或在镜下观察至背景干净、脂滴鲜红即可。

　　立即用蒸馏水冲洗3次，终止分化并洗去残留异丙醇。

　　5. 细胞核复染

　　加入 Mayer's 苏木素，复染 1-3分钟。

　　用蒸馏水或PBS冲洗，可浸泡于PBS中 5分钟 促进返蓝(细胞核变蓝)。

　　6. 封片与观察

　　吸去多余水分(勿让样本干透)，滴加水性封片剂(如甘油明胶)，盖上盖玻片。

　　尽快观察拍照：油红O染色结果不稳定，建议在 24小时内 完成成像，避免染料析出结晶影响判断。

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