e测试乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测方法

　　乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase, LDH)细胞毒性检测是一种经典的、非放射性的细胞毒性定量分析方法，通过检测细胞膜破损后释放到培养基中的LDH活性，来评估细胞损伤或死亡的程度。

　　检测原理

　　LDH是一种广泛存在于几乎所有哺乳动物活细胞胞质中的稳定酶，在细胞能量代谢中催化乳酸与丙酮酸之间的相互转化。

　　其核心原理为：

　　活细胞的细胞膜保持完整，LDH被保留在细胞内;

　　当细胞受到毒性物质损伤(坏死、凋亡继发性坏死、焦亡等)，细胞膜完整性被破坏，胞内LDH释放到培养基中;

　　释放的LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD⁺还原为NADH;

　　NADH再通过偶联酶反应，将四唑盐(如INT、WST-8)或荧光底物(如刃天青)还原为有色产物或荧光产物;

　　产物的量与释放的LDH活性成正比，从而间接反映细胞死亡数量。

　　检测方法

　　比色法(INT法)

　　LDH催化NAD⁺→NADH，NADH在黄递酶(Diaphorase)催化下将INT还原为红色甲瓒(Formazan)，在490~500 nm处测定吸光度。

　　比色法(WST-8法)

　　原理与INT法类似，但使用WST-8作为显色底物，灵敏度更高，吸光度变化更大，检测结果更准确。

　　荧光法(刃天青法)

　　NADH在黄递酶催化下将刃天青(Resazurin)还原为高荧光的试卤灵(Resorufin)，激发波长560 nm，发射波长590 nm，灵敏度优于比色法。

　　发光法(LDH-Glo™)

　　基于生物发光的超灵敏检测，NADH通过还原酶底物生成萤光素，再由萤光素酶催化产生发光信号，z低可检测<10个细胞的LDH释放。

       来源：网络