生物实验外包：抗菌实验方法

　　实验目的不同，通常采用以下三种经典方法：

　　① 琼脂扩散法(打孔法/滤纸片法)

　　操作： 将标准浓度的菌液均匀涂布在固体琼脂平板上。用打孔器在琼脂上打孔(或放置无菌滤纸片)，然后在孔/纸片中滴加不同浓度的抗菌物质。

　　培养与测量： 放入37℃培养箱培养18-24小时。

　　结果判定： 观察并测量抑菌圈的直径。抑菌圈越大，说明该物质的抗菌活性越强。此方法直观、简单，常用于初步筛选。

　　② 微量肉汤稀释法(测定z小抑菌浓度 MIC)

　　操作： 在96孔细胞培养板中，将抗菌物质进行连续的倍比稀释(如 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1 mg/mL)。每孔加入等量的标准菌液。同时设置只加菌液的阳性对照孔和只加培养基的阴性对照孔。

　　培养与判定： 37℃培养18-24小时后，观察孔内液体的浑浊度。

　　结果判定： 肉眼观察完全澄清(即细菌没有生长)的z低药物浓度孔，就是该抗菌物质对目标菌的z小抑菌浓度(MIC)。MIC值越低，说明抗菌效果越好。

　　③ 活菌计数法(测定z小杀菌浓度 MBC)

　　操作： 在MIC测试的基础上，从所有澄清的孔(以及阳性对照孔)中吸取等量菌液，涂布到新鲜的固体琼脂平板上。

　　培养与判定： 培养过夜后，计算平板上长出的菌落数(CFU)。

　　结果判定： 能使细菌存活率下降99.9%(即杀灭99.9%的细菌)的z低药物浓度，就是z小杀菌浓度(MBC)。

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