LNP粒径分布测定方法有哪些？

　　脂质纳米粒(LNP)的粒径分布测定是决定其递送效率、生物分布和稳定性的核心质控环节。

　　LNP粒径测试已从单一的动态光散射(DLS)向“正交方法”(即多种技术互补验证)转变。特别是对于非球形LNP和复杂异质样品，传统的DLS已显现出局限性。

　　测试方法

　　动态光散射法(DLS)—— 行业“金标准”

　　这是目前应用广泛、药典(USP/EP/ChP)收录的方法。

　　原理：基于布朗运动，通过测量颗粒散射光强的波动来计算流体力学直径。

　　优势：操作简单、快速、样品无损，适合测定平均粒径(Z-Average)和多分散系数(PDI)。

　　局限：

　　对大颗粒极度敏感：少量的团聚体或灰尘会掩盖主体信号(光强与直径的6次方成正比)。

　　假设球形：DLS计算基于球形假设，对于非球形LNP(如棒状、盘状)，结果会有偏差。

　　分辨率低：难以区分粒径相近的不同亚群(如空载LNP与载药LNP)。

　　冷冻电镜(Cryo-EM)—— 形态与粒径的“视觉真相”

　　随着LNP研发深入，Cryo-EM已成为DLS不可或缺的补充，特别是在解决“非球形”和“内部结构”问题上。

　　原理：将样品速冻在玻璃态冰中，保持近天然状态，直接成像观察。

　　核心优势：

　　直观可视：能直接看到LNP是球形、椭球形还是异形，以及内部是否有“泡状结构”。

　　区分空/实：配合染色或AI分析，可区分空载LNP(无内部电子致密核心)和载药LNP，这是DLS做不到的。

　　数均粒径：提供基于颗粒计数的真实粒径分布(D10, D50, D90)，不受大颗粒光强干扰。

　　分析超速离心(AUC)—— 解决“异质性”难题

　　AUC是2025年备受关注的“黑马”技术，用于解决DLS分辨率不足的问题。

　　原理：利用离心力根据颗粒的沉降系数和扩散系数进行分离。

　　优势：

　　高分辨率：能精准分离并定量不同密度的颗粒群(如游离mRNA、空LNP、载药LNP)。

　　无需稀释：可在全浓度或宽浓度范围内测试，避免了稀释导致的LNP解组装或假象。

　　原位测试：不需要色谱柱，避免了SEC(尺寸排阻色谱)可能带来的剪切破坏。

　　其他辅助方法

　　纳米颗粒跟踪分析(NTA)：通过追踪单个颗粒的布朗运动，提供颗粒浓度信息，分辨率优于DLS，但操作较繁琐。

　　毛细管流体分离技术(CHDF)：先分离后检测，能揭示DLS无法发现的“多峰分布”(如样品中同时存在80nm和200nm的颗粒)。

       来源：网络