spr分子结合方法步骤

　　表面等离子体共振(Surface Plasmon Resonance, SPR) 是研究分子间相互作用(如蛋白 - 蛋白、蛋白 - 小分子、DNA-蛋白、抗体 - 抗原)的“金标准”技术。与 BLI 类似，SPR 也能实时、无标记地检测结合过程，但其基于棱镜耦合的光学原理，通常具有更高的灵敏度、更低的噪音和更稳定的流体控制系统。

　　关键步骤：配体固定化 (Ligand Immobilization)

　　SPR 实验的第一步是将其中一个分子(配体，Ligand)固定在传感器芯片表面。选择合适的固定化策略对实验成功至关重要。

　　1. 共价偶联 (Covalent Coupling) —— 常用

　　适用：大多数蛋白、多肽、小分子。

　　芯片类型：CM5 芯片(羧甲基葡聚糖表面)。

　　化学原理：胺偶联 (Amine Coupling)。

　　活化：注入 EDC/NHS 混合液，将芯片表面的羧基转化为活泼的 NHS 酯。

　　偶联：注入配体(含伯氨基 -NH₂，如赖氨酸侧链或 N 端)，与 NHS 酯反应形成稳定的酰胺键。

　　封闭：注入乙醇胺(Ethanolamine)封闭未反应的活性位点，防止非特异性结合。

　　优点：结合牢固，耐受再生条件。

　　缺点：随机取向可能遮挡结合位点;需优化 pH 值。

　　2. 亲和捕获 (Affinity Capture) —— 推荐用于复杂蛋白

　　适用：抗体、带标签蛋白(His, GST, Biotin 等)。

　　芯片类型：

　　Protein A/G/L 芯片：直接捕获抗体 Fc 段，确保抗原结合位点朝外(定向固定)。

　　NTA 芯片：捕获 His 标签蛋白。

　　SA 芯片 (Streptavidin)：捕获生物素化(Biotinylated)分子。

　　优点：定向固定，活性高;可再生芯片(洗掉配体后重新捕获新的)，批次间一致性好。

　　缺点：成本较高;存在配体脱落风险。

　　3. 疏水/脂质体捕获

　　适用：膜蛋白、脂质体相互作用。

　　芯片类型：L1 芯片(疏水表面)或 LMP 芯片(预固定脂质体)。

　　方法：直接将含有膜蛋白的脂质体融合到芯片表面。

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