肝细胞脂肪变性切片染色方法

　　肝细胞脂肪变性(Hepatic Steatosis，俗称脂肪肝)的组织切片观察是病理诊断的“金标准”。其核心在于清晰显示细胞质内的脂滴，并区分大泡性(Macrovesicular)和小泡性(Microvesicular)脂肪变性，同时评估炎症和纤维化程度。

　　由于常规石蜡切片制作过程中使用的有机溶剂(如二甲苯、酒精)会溶解脂质，导致脂滴在显微镜下呈现为空的圆形空泡。因此，根据实验目的不同(是仅需观察形态，还是需定量脂质成分)，选择不同的制片和染色策略至关重要。

　　关键染色方法

　　1. 苏木精 - 伊红染色 (H&E) —— 基础筛查

　　结果：

　　细胞核：蓝紫色。

　　细胞质/肌肉：粉红色。

　　脂滴：无色透明空泡(石蜡切片)。

　　判读：

　　根据空泡大小和数量进行半定量评分(如NAS评分系统)。

　　观察气球样变(Ballooning degeneration)：细胞肿大，胞质疏松淡染，网状结构消失。

　　2. 油红O染色 (Oil Red O, ORO) —— 脂质显色金标准

　　要求：必须使用冰冻切片。

　　原理：油红O是一种脂溶性偶氮染料，在脂质中的溶解度大于在溶剂(异丙醇/乙醇)中的溶解度，从而从染液中析出并沉积在脂滴中。

　　结果：

　　脂滴：鲜红色或橙红色。

　　细胞核：苏木精复染呈蓝色。

　　背景：浅色。

　　操作关键点 (2026版优化)：

　　染液配制：使用异丙醇作为溶剂配制饱和溶液(比乙醇溶解度更高，染色更深)，使用前用蒸馏水稀释至6:4比例，并过滤去除沉淀(防止假阳性颗粒)。

　　分化：染色后需用60%异丙醇快速分化，洗去非特异性吸附。

　　封片：必须使用水性封片剂(如甘油明胶)，严禁使用树脂类封片剂(含二甲苯会溶解脂质和染料)。

　　3. 尼罗红染色 (Nile Red) —— 荧光定量首选

　　要求：冰冻切片或活细胞。

　　原理：环境敏感性荧光染料。

　　在极性环境(细胞质)中发弱红光/黄光。

　　在非极性环境(中性脂滴)中发强金黄色/红色荧光。

　　优势：灵敏度极高，可区分中性脂(黄色荧光)和极性脂(红色荧光)，适合共聚焦显微镜观察和图像软件自动定量分析。

　　适用：高通量药物筛选、微量化分析。

　　4. 特殊纤维化染色 (配合脂肪变评估)

　　脂肪肝常伴随纤维化，需结合以下染色评估NAFLD/NASH进程：

　　Masson 三色染色：胶原纤维呈蓝色，肌肉/细胞质呈红色，核呈黑褐色。

　　天狼猩红染色 (Sirius Red)：在偏振光下可区分胶原类型(I型呈红/黄色，III型呈绿色)，是定量纤维化的金标准。

       来源：网络