spr抗体结合测定实验流程

　　表面等离子体共振(SPR, Surface Plasmon Resonance) 是目前测定抗体 - 抗原结合动力学( kon,koffkon​,koff​ )和亲和力( KDKD​ )的金标准技术。它无需标记，能实时监测结合过程，广泛应用于抗体药物筛选、表位作图(Epitope Binning)及质量控制。

　　标准实验流程 (Standard Workflow)

　　1. 缓冲液优化 (Buffer Optimization)

　　运行缓冲液 (Running Buffer)：通常为PBS或HBS-EP (含0.005% Tween-20)。

　　关键点：必须与样品透析缓冲液严格匹配，以消除折射率差异引起的 bulk shift(整体漂移)。

　　DMSO校正：若筛选小分子，需做DMSO浓度梯度校正。

　　再生缓冲液 (Regeneration Buffer)：用于解离复合物而不损伤固定蛋白。

　　常用：10 mM Glycine-HCl (pH 1.5-2.5), 10-50 mM NaOH, 或高盐溶液。需通过预实验摸索z佳条件。

　　2. 实验步骤

　　基线平衡：用运行缓冲液冲洗至基线平稳。

　　固定/捕获：

　　若用捕获法：注入Anti-Fc -> 捕获抗体 (目标响应值通常设为 100-300 RU)。

　　结合阶段 (Association)：

　　注入不同浓度的抗原(通常5-7个浓度，呈2-3倍稀释)。

　　接触时间：足够长以达到平衡或获得明显的结合曲线(通常60-300秒)。

　　解离阶段 (Dissociation)：

　　切换回运行缓冲液，监测复合物解离。

　　时间：取决于 koffkoff​ ，慢解离需监测数分钟至数小时。

　　再生 (Regeneration)：

　　短脉冲注入再生液，使信号回到基线，准备下一轮循环。

　　双参考扣除 (Double Referencing)：

　　扣除空白通道(无蛋白)的信号。

　　扣除零浓度缓冲液注射的信号(消除系统噪音和bulk shift)。

       来源：网络