凯氏定氮法测定蛋白质含量

　　凯氏定氮法(Kjeldahl Method)是测定蛋白质含量的经典标准方法，广泛应用于食品、饲料、土壤、生物样品等领域。其原理基于：蛋白质含氮量相对恒定(平均约16%)，通过测定总氮量，乘以换算系数即可推算蛋白质含量。

　　操作步骤(以GB 5009.5为例)

　　1. 试剂准备

　　催化剂：

　　经典：K₂SO₄ + CuSO₄(10:1)

　　现代：Se 或 TiO₂ 催化剂(加速消化，减少 SO₂ 排放)

　　消化液：浓 H₂SO₄(优级纯)

　　吸收液：2% 硼酸(H₃BO₃)溶液 + 混合指示剂(甲基红-溴甲酚绿)

　　滴定液：0.01–0.1 mol/L 盐酸(HCl)或硫酸标准溶液

　　2. 样品处理

　　固体样品：粉碎、混匀，称取 0.5–2.0 g(含氮 10–80 mg);

　　液体样品：吸取适量，必要时浓缩;

　　空白对照：与样品同法处理(仅加催化剂+酸)。

　　3. 消化

　　样品 + 催化剂 + 10 mL 浓 H₂SO₄ → 低温炭化 → 升温至 360–410°C;

　　消化终点：溶液澄清透明，呈蓝绿色(Cu²⁺颜色);

　　冷却，定容至 100 mL(消化液)。

　　4. 蒸馏与吸收

　　取 10–20 mL 消化液 → 加 50 mL 40% NaOH → 蒸馏;

　　馏出液通入 10 mL 2% 硼酸 + 指示剂 中;

　　蒸馏 5–10 min，确保氨完全蒸出。

　　5. 滴定

　　用标准 HCl 滴定至溶液由绿色变为灰红色;

　　记录消耗 HCl 体积(V，mL)。

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