药物和靶点亲和力测定方法选择

　　药物与靶点亲和力测定是药物发现与优化的核心环节，用于量化小分子、抗体或肽类药物与其生物靶标(如蛋白、酶、受体、核酸)的结合强度。亲和力通常以平衡解离常数(KD)表示，KD 越小，结合越强。下面是主流测定方法、选择策略及行业实践指南。

　　方法选择指南(按药物类型)

　　1. 小分子药物(<900 Da)

　　首选：SPR 或 BLI

　　可测动力学(koff 决定药效持续时间)

　　无需标记(避免修饰影响活性)

　　补充：ITC

　　获取 ΔH/ΔS，指导结构优化(如增加氢键 vs. 疏水作用)

　　高通量筛选：FP / TR-FRET(需标记靶点或配体)

　　 案例：激酶抑制剂开发中，SPR 测得 koff > 1 小时 → 体内药效显著延长。

　　2. 治疗性抗体(IgG, scFv, 双抗)

　　金标准：SPR(Biacore™)

　　提供 ka/kd/KD，用于 IND 申报

　　支持表位 binning(竞争结合分析)

　　高通量初筛：Octet® BLI

　　96 孔板格式，快速比较数十个候选分子

　　细胞水平验证：流式细胞术 或 Cell-based SPR

　　注意：测 IgG 时得到的是表观亲和力(avidity)，需用 Fab 片段测真实 affinity。

　　3. 难成药靶点(如蛋白-蛋白相互作用 PPI)

　　弱亲和力(KD > 10 μM)：ITC(直接测热，不受背景干扰)

　　无合适标记位点：MST(利用 intrinsic 荧光，如色氨酸)

       来源：网络