冰冻切片油红染色操作流程

　　冰冻切片油红O(Oil Red O, ORO)染色是一种特异性显示中性脂质(如甘油三酯、胆固醇酯)的经典组织化学方法，广泛应用于动脉粥样硬化、脂肪肝、肥胖、代谢综合征及脂质沉积病等研究。由于脂质在常规石蜡包埋过程中会被有机溶剂(二甲苯、乙醇)溶解，必须使用冰冻切片以保留脂滴结构。

　　标准操作流程(以小鼠肝脏/主动脉为例)

　　【前期准备】

　　染液配制(现配现用或4℃避光保存≤1周)：

　　油红O粉末 0.5 g + 异丙醇 100 mL → 60℃水浴助溶 → 冷却后加蒸馏水40 mL(终浓度：0.3% 油红O in 60% 异丙醇);

　　过滤：用0.22 μm滤膜去除结晶，避免背景颗粒。

　　【染色步骤】

　　冰冻切片制备：组织 OCT包埋，-20℃冷冻切片(厚度 6–10 μm);

　　切片贴附于防脱载玻片(如Superfrost Plus);

　　切片后立即染色，或 -80℃干燥保存(勿固定!)。

　　室温晾干：切片空气中干燥 10–15 分钟(禁止加热或固定!)。

　　60%异丙醇分化：浸入60%异丙醇 1–2 分钟 → 去除水分，增强染料渗透。

　　油红O染色：浸入新鲜过滤的油红O染液 10–15 分钟(避光);

　　时间优化：脂肪肝可缩短至5–10 min，动脉斑块可延长至20 min。

　　分化与清洗：60%异丙醇快速分化(数秒至背景清晰);

　　蒸馏水轻柔漂洗 2–3 次。

　　复染(可选但推荐)：苏木素：30–60 秒 → 盐酸酒精分化 → 氨水蓝化 → 显示细胞核;

　　DAPI(荧光)：1 μg/mL, 5 min → 适用于共聚焦成像。

　　封片：水溶性封片剂(如Glycerol-PBS、Aquamount);

　　禁止用二甲苯透明+中性树胶(会溶解脂滴!)。

       来源：网络