脂肪组织代谢物浓度检测

　　脂肪组织(Adipose Tissue)代谢物浓度检测是研究肥胖、胰岛素抵抗、脂质代谢紊乱及代谢综合征的核心手段。由于脂肪组织富含脂质、胶原和疏水性成分，其代谢物提取与定量需特殊处理以避免降解、氧化或基质干扰。

　　1. 甘油三酯(TAG)与总胆固醇

　　方法：商用酶学试剂盒(如 Sigma TR0100, MAK043)

　　步骤：

　　脂肪组织匀浆 → 异丙醇提取脂质 → 离心取上清

　　按说明书加酶反应 → 测 OD 540 nm(TAG)或 570 nm(Chol)

　　标准化：结果表示为 μmol/g tissue 或 mg/g protein

　　2. 游离脂肪酸(FFA)

　　LC-MS/MS 条件：

　　色谱柱：C18(2.1 × 100 mm, 1.7 μm)

　　流动相：A=水+0.1%甲酸，B=乙腈+0.1%甲酸

　　检测模式：负离子 ESI，MRM 扫描(如 m/z 255.2→255.2 for C16:0)

　　关键：避免样品氧化 → 提取时加 0.01% BHT(抗氧化剂)

　　3. 磷脂与鞘脂

　　靶向脂质组学(Targeted Lipidomics)：

　　使用 MRM 方法 定量数百种磷脂(PC、PE、PS、SM 等)

　　内标：各类氘代磷脂(如 PC(16:0-d31/18:1))

　　4. 能量代谢物(ATP、乳酸等)

　　水相提取物 → LC-MS/MS 或 酶法

　　ATP 检测：荧光素酶法(高灵敏，可达 fmol)

       来源：网络