抗菌活性抑菌圈操作流程

　　抗菌活性抑菌圈实验(又称琼脂扩散法或Kirby-Bauer 法)是评估抗菌物质(如抗生素、抗菌肽、植物提取物、纳米材料等)对细菌抑制能力的经典方法。其原理是：抗菌物质在琼脂培养基中扩散，形成浓度梯度，在有效浓度范围内抑制细菌生长，从而在菌苔上形成透明的抑菌圈，圈的大小反映抗菌活性强弱。

　　标准操作流程(以纸片扩散法为例)

　　1. 材料准备

　　测试菌株(如 E. coli ATCC 25922, S. aureus ATCC 29213)

　　Mueller-Hinton Agar(MHA)平板(标准培养基，厚度 4 mm)

　　抗菌样品(溶液、提取物、抗生素标准品)

　　无菌滤纸片(直径 6 mm)或牛津杯(不锈钢小管)

　　麦氏比浊管(0.5 McFarland ≈ 1–2 × 10⁸ CFU/mL)

　　无菌棉签、镊子、移液器

　　2. 菌液制备

　　挑取单菌落接种于液体培养基(如 LB)，37℃ 振荡培养至对数期;

　　用生理盐水调整菌液浓度至 0.5 麦氏单位(约 10⁸ CFU/mL)。

　　3. 涂布平板

　　用无菌棉签蘸取菌液，均匀涂布于 MHA 平板表面，重复 3 次(每次旋转 60°);

　　室温静置 5–10 分钟，使菌液吸收。

　　4. 加样

　　纸片法：用无菌镊子将含样品的滤纸片(如 10 μL 样品滴加后晾干)贴于平板;

　　牛津杯法：将灭菌牛津杯置于平板，加入 50–100 μL 样品溶液;

　　打孔法：用打孔器在凝固琼脂上打孔(直径 6–8 mm)，加入样品。

　　设置对照：

　　阳性对照：已知抗生素(如氨苄西林、庆大霉素);

　　阴性对照：溶剂(如 DMSO、水、乙醇)。

　　5. 培养

　　37℃ 倒置培养 16–24 小时(根据菌种调整)。

　　6. 结果测量

　　用游标卡尺或抑菌圈测量仪测量抑菌圈直径(包括纸片/孔径);

　　单位：毫米(mm);

　　每个样品至少做 3 个重复，取平均值。

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