JC-1染色实验步骤

　　JC-1膜电位检测是一种非常经典和广泛使用的荧光染色方法，用于通过流式细胞术或荧光显微镜评估线粒体膜电位(ΔΨm)。线粒体膜电位的下降是细胞早期凋亡的一个关键标志。

　　实验前准备：

　　JC-1染料(通常以干粉或DMSO溶液提供)

　　JC-1染色缓冲液(通常包含在试剂盒中，或使用PBS、HBSS等)

　　阳性对照药物(如CCCP，一种线粒体解偶联剂，可彻底消除膜电位，作为红色荧光消失的对照)

　　流式细胞仪(配备488 nm激发光，并能同时检测FITC和PE通道)

　　操作流程：

　　细胞准备与处理：

　　收集待检测的细胞(贴壁细胞需消化，但避免过度消化)，用PBS洗涤一次。

　　用预热的JC-1染色缓冲液重悬细胞，调整细胞密度至约1×10⁶ cells/mL。

　　(可选)设置阳性对照：取一部分细胞，加入CCCP(如50 μM)处理15-20分钟。

　　JC-1染色：

　　按照说明书推荐浓度(通常终浓度为1-10 μM)，向细胞悬液中加入JC-1工作液。

　　充分混匀后，于37°C细胞培养箱中，避光孵育15-30分钟。

　　洗涤与重悬：

　　孵育结束后，用预冷的JC-1染色缓冲液或PBS洗涤细胞1-2次，以去除背景染料。

　　用适量染色缓冲液重悬细胞，并立即上机检测。整个过程需避光。

　　流式细胞仪检测：

　　使用488 nm激光激发。

　　检测绿色荧光(JC-1单体)：通常在 FITC通道(约530/30 nm)检测。

　　检测红色荧光(JC-1聚合物)：通常在 PE通道(约585/42 nm)检测。

       来源：网络