动物组织石蜡切片步骤

　　它主要包括取材与固定、脱水透明、浸蜡与包埋、切片与展片、染色与封片五个核心步骤。

　　下面是详细的流程和说明：

　　动物组织石蜡切片完整流程

　　一、 取材与固定

　　目的：获取新鲜组织，并立即通过化学方法保持其原始形态结构，防止腐败和自溶。

　　取材：

　　迅速从动物体取出目标组织。

　　组织块大小要适中，一般不超过 1.0 cm × 1.0 cm × 0.3 cm，以保证固定液和后续试剂能充分渗透。

　　操作轻柔，避免牵拉或挤压组织。

　　固定：

　　常用的固定液是 10% 中性福尔马林。

　　固定液体积应为组织块的 10-20 倍。

　　固定时间根据组织大小和类型而定，通常为 24-48 小时。

　　二、 脱水与透明

　　目的：去除组织内的水分，并为石蜡的浸入准备条件。

　　脱水：

　　将组织依次通过一系列浓度递增的酒精(如 70%、80%、90%、95%、100% I、100% II)。

　　每一步的时间根据组织大小而定，通常每步 1-2 小时。目的是逐步、彻底地去除水分。

　　透明：

　　脱水后，组织需要用一种既能与酒精混溶，又能溶解石蜡的试剂(透明剂)处理。

　　z常用的透明剂是 二甲苯。

　　组织通常经过 二甲苯 I、二甲苯 II 两步，直至组织变得透明。这一步是脱水和浸蜡之间的桥梁。

　　三、 浸蜡与包埋

　　目的：用石蜡支撑组织，以便切成薄片。

　　浸蜡：

　　将透明后的组织放入 熔化的石蜡 中。

　　通常在 60°C 左右的温箱中进行。

　　需要更换 2-3 次 新鲜石蜡，以确保石蜡完全取代组织中的透明剂。总浸蜡时间通常为数小时甚至过夜。

　　包埋：

　　将浸透石蜡的组织放入装有熔化石蜡的包埋盒中。

　　仔细调整组织的位置和方向(这决定了切面的方向)。

　　然后将其放在冷台上，使石蜡迅速凝固成坚硬的蜡块。

　　四、 切片与展片

　　目的：将蜡块切成薄而均匀的切片，并将其平整地贴在载玻片上。

　　修块与切片：

　　用切片机修整蜡块，暴露组织面。

　　将蜡块固定在切片机上，调整切片厚度，通常为 4-7 μm。

　　匀速转动切片机手柄，会切出连续、透明的带状切片。

　　展片与捞片：

　　将切下的蜡带小心移入 40-45°C 的温水中。切片受热后会自然展开平整。

　　用涂有粘附剂(如多聚赖氨酸)的载玻片伸入水中，将展开的切片捞起。

　　倾斜载玻片，沥去多余水分，然后放入 60°C 烘箱中烘干 30-60 分钟，使切片牢固地贴在载玻片上。

　　五、 染色与封片

　　目的：使组织的不同结构呈现出不同的颜色，便于显微镜下观察，并永久保存。

　　脱蜡与水化：

　　将烘干的切片依次放入 二甲苯 I、二甲苯 II 以去除石蜡，各 10-20 分钟。

　　然后依次通过浓度递减的酒精(100%、95%、90%、80%、70%)至水，每步数分钟。这个过程称为“水化”，是为水溶性染料进入细胞做准备。

　　染色：

　　经典、常用的方法是 苏木精 (Hematoxylin) 和 伊红 (Eosin) 染色，简称 H&E 染色。

　　苏木精：碱性染料，主要将细胞核染成 蓝紫色。

　　伊红：酸性染料，主要将细胞质和胶原纤维等染成 粉红色。

　　脱水与透明：

　　染色后，切片需要再次通过浓度递增的酒精进行脱水。

　　然后使用二甲苯进行透明，使组织切片变得清澈。

　　封片：

　　在组织切片上滴一滴中性树胶，然后盖上盖玻片。

　　中性树胶干燥后，切片就被永久封固，可以在显微镜下长期观察。

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