冰冻切片HE染色的原理及注意事项

　　冰冻切片HE染色(Frozen Section H&E Staining) 是一种常用于术中快速病理诊断的组织染色方法。与常规石蜡切片不同，冰冻切片无需长时间的脱水、透明和浸蜡过程，可在短时间内完成组织切片和染色，适用于需要快速获得病理结果的情况，如手术中判断肿瘤边界等。

　　一、冰冻切片HE染色的原理

　　1. 苏木精染色(Hematoxylin)

　　作用对象：细胞核中的DNA和RNA。

　　染色效果：呈蓝紫色或深蓝色。

　　机制：苏木精为碱性染料，可与酸性物质结合(嗜碱性)。

　　2. 伊红染色(Eosin)

　　作用对象：细胞质中的蛋白质(如肌动蛋白、酶类)、胶原纤维等。

　　染色效果：呈粉红色至红色。

　　机制：伊红为酸性染料，可与碱性成分结合(嗜酸性)。

　　二、冰冻切片HE染色的优点

　　优点 描述

　　快速 整个过程通常在30分钟内完成

　　不需脱蜡 避免了石蜡切片繁琐的脱蜡步骤

　　保存抗原性 更适合后续免疫组化或荧光染色

　　保留脂类 可较好地保存脂肪、酶类等易溶于有机溶剂的成分

　　三、冰冻切片HE染色的操作流程(以冷冻组织切片为例)

　　所有操作应在通风良好的环境中进行，并佩戴防护装备。

　　1. 样本准备

　　将新鲜组织迅速放入OCT包埋剂中，置于液氮中速冻。

　　放入冰冻切片机(Cryostat)中，切成5~8 μm厚度的切片。

　　将切片贴附在载玻片上，室温晾干数分钟。

　　2. 固定(可选)

　　用95%乙醇或丙酮固定切片约30秒至1分钟，增强结构稳定性。

　　空气干燥。

　　3. 苏木精染色

　　将切片浸入苏木精染液中染色约30秒至1分钟。

　　自来水冲洗去除多余染液。

　　4. 分化(可选)

　　使用1%盐酸酒精分化几秒钟，使细胞核更清晰。

　　自来水冲洗终止反应。

　　5. 蓝化

　　浸入弱碱性溶液(如氨水或流水冲洗)约10~30秒，使细胞核颜色变蓝。

　　再次自来水冲洗。

　　6. 伊红染色

　　浸入伊红染液中染色约30秒至1分钟。

　　染色时间可根据染液浓度调整。

　　7. 脱水透明

　　快速通过梯度乙醇(70% → 95% → 100%)各约10秒。

　　二甲苯或其他透明剂中浸泡1~2分钟。

　　8. 封片

　　滴加中性树胶或DPX封片剂，盖上盖玻片后封固。

　　四、冰冻切片HE染色注意事项

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