WB利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
(SDS-PAGE),将抗体作为探针,标记的二抗作为显色工具,来分离指定样品中包含的各种蛋白质。将分离的蛋白质样品转移到固相载体(如硝酸纤维素或PVDF
膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。接下来,将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中,未结合的抗体被洗掉,只留下与目标蛋白质结合的抗体,最后通过显影胶片或荧光扫描来检测结合的抗体。
根据原理,蛋白免疫印迹可分为两种方法:直接法、间接法。
表1. 两种方法的优缺点

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