WB测试目的蛋白和内参蛋白条带粗细情况

　　上图为蛋白上样品25ug，下图上样量为10ug;客户反馈：内参为什么会这么高?蛋白上样量减少，目标蛋白和内参蛋白不会都减少吗?

　　技术回复：

　　(1)虽然降低了整体上样量，但内参条带仍很粗可能是因为内参蛋白的表达量相对较高，即使上样量降低，其在凝胶中的含量仍足以形成较粗的条带;而目的蛋白可能本身表达量较低，上样量降低后条带变细。

　　(2)再一个内参和目的蛋白的稳定性不同，内参蛋白一般更稳定，在实验过程中不易降解，而目的蛋白可能相对不稳定，上样量降低后更容易受到影响。

　　(3)还有就是抗体特异性这块。所用抗体对目的蛋白和内参蛋白的结合特异性可能存在差异。如果抗体对目的蛋白的结合效率因上样量降低而下降更多，就会导致目的条带变细;而对内参蛋白的结合可能受影响较小，所以内参条带较粗。

       来源：网络