纳米颗粒负染色的操作流程

　　纳米颗粒的负染色与生物样品(如细菌、病毒)有显著区别。纳米颗粒通常由金属、聚合物或脂质等低电子密度材料构成，本身在透射电镜(TEM)下反差极弱。负染色的核心目的，是利用重金属盐在颗粒周围形成高电子密度的“背景”，从而在暗背景下反衬出纳米颗粒的形貌、尺寸、分散性及表面结构。

　　下面是针对纳米颗粒负染色的操作流程

　　操作流程

　　样品分散与稀释

　　将纳米颗粒样品用去离子水或有机溶剂(如乙醇、丙酮，需与染色剂兼容)超声分散，并稀释至适宜浓度(通常建议 0.1-2 mg/mL)。浓度过高会导致颗粒团聚，过低则难以寻找视野。

　　载网制备

　　选用覆有碳支持膜的铜网。碳膜能提供均匀的支撑背景，避免颗粒直接吸附在铜网网格上。若颗粒疏水性强，可预先对碳膜进行辉光放电处理以增加亲水性。

　　样品吸附

　　用移液器吸取 5-10 μL 稀释后的样品滴加在载网上，静置吸附 1-5 分钟。随后用滤纸从载网边缘轻轻吸去多余液体，切勿触碰样品区域。

　　负染色

　　滴加 5-10 μL 负染液(如 2% 磷钨酸或 2% 醋酸铀)，染色 1-5 分钟。对于粒径极小的颗粒(<10 nm)，可适当延长染色时间或采用多次短时染色法。

　　清洗与干燥

　　用滤纸吸去多余染液后，滴加去离子水清洗 1-3 次以去除过量染色剂。z后吸干水分，将载网置于干燥器中室温干燥 2-24 小时，或在 30-40°C 烘片机上干燥 20 分钟至 2 小时。

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