SPR实验阳性对照与阴性对照设置方法

　　在表面等离子共振(SPR)实验中，合理设置对照组是确保结合数据准确、排除非特异性干扰并验证实验系统有效性的关键。根据实验规范，SPR实验的阳性对照与阴性对照设置方法如下：

　　一、 阴性对照(Negative Control)设置方法

　　阴性对照的核心目的是验证整个实验系统是否存在非特异性反应，排除假阳性信号及背景干扰。

　　参比通道对照(Reference Channel)：在芯片上设置一个未固定配体(Ligand)的参比通道。在进样分析物(Analyte)时，该通道仅注入运行缓冲液。通过扣除参比通道的信号，可以有效消除由缓冲液、试剂或仪器本身带来的基础背景信号及非特异性结合干扰。

　　裸露芯片表面测试：在进行正式实验前，可让分析物流过没有任何固定化配体的裸露传感器表面。若观察到显著水平的非特异性结合(NSB)，则需通过调整缓冲液pH值、增加盐浓度、添加非离子表面活性剂或蛋白质阻断添加剂等策略来优化实验条件。

　　空白缓冲液对照：在设置分析物浓度梯度时，必须包含一个空白缓冲液对照(即不含分析物的运行缓冲液)，用于校准仪器的本底值(Baseline)。

　　二、 阳性对照(Positive Control)设置方法

　　阳性对照的核心作用是确认实验体系(如芯片活化、配体固定、仪器检测)能够正常检测到目标信号，排除假阴性结果，并校准实验灵敏度。

　　已知互作分子对照：使用已知能够与固定化配体发生特异性结合的分子作为阳性对照。例如，在研究SARS-CoV-2 PLpro酶与其抑制剂时，可使用已验证的对照抑制剂(如GRL0617)作为阳性对照进样，以确认PLpro蛋白在芯片上保持了正确的结合活性。

　　互补野生型蛋白对照：在蛋白质相互作用研究中，可使用具有互补野生型界面的分析物作为正向结合对照。例如，在研究ETV6 PNT结构域聚合界面时，使用野生型PNT结构域作为阳性对照，验证结合系统的有效性。

　　系统有效性验证：在每次正式实验运行前或实验批次中，通过阳性对照确认配体固定量、仪器流速及检测器响应均处于正常状态。若阳性对照未显示出预期的结合信号，则说明实验条件存在问题(如配体失活或试剂失效)，需重新调整。

　　三、 对照组设置的核心原则

　　条件严格匹配：阳性对照与阴性对照的处理条件(如温度、流速、进样时间)必须与实验组完全一致，以确保数据的可比性。

　　避免交叉污染：对照样本与实验样本需分区域或按合理顺序操作，防止交叉污染导致结果混淆。

　　预实验验证：在正式实验前，建议先进行预实验验证对照组的有效性，避免因对照失效导致整体实验失败。

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