e测试细胞实验外包：细胞存活率测定方法

　　细胞存活率(Cell Viability)是指在细胞群体中，活细胞所占的百分比。它是评估细胞健康状态、药物毒性及增殖能力的重要指标。目前实验室常用的细胞存活率测定方法主要分为以下几类：

　　一、 染料排除法(直接计数法)

　　这是经典、常用的细胞活力鉴定方法。其原理是利用活细胞完整的细胞膜能够排斥某些染料，而死细胞膜通透性增加，染料进入细胞使其着色。

　　台盼蓝(Trypan Blue)法：死细胞被染成蓝色，活细胞不着色。在显微镜下结合细胞计数板进行人工计数，或使用自动细胞计数仪进行统计。

　　计算公式：活细胞率(%) = (活细胞数 / 总细胞数) × 100%。

　　适用场景：常用于细胞传代、冻存复苏后的快速状态评估。

　　二、 比色法(代谢活性检测)

　　基于活细胞内的酶(如线粒体琥珀酸脱氢酶)具有还原能力，能将特定的底物转化为有色产物，颜色的深浅与活细胞数量及活力成正比。

　　MTT法：作为“元老”级方法，MTT被活细胞还原为不溶于水的蓝紫色结晶(甲臜)，需加入DMSO溶解后在570 nm左右测定吸光度。该方法经典但步骤繁琐，且DMSO具有一定毒性。

　　CCK-8法：基于WST-8底物，被细胞内脱氢酶还原为高度水溶性的橙黄色甲臜产物。相比MTT，CCK-8操作更简便、灵敏度更高，无需溶解步骤，直接在450 nm波长下测定吸光度即可。

　　计算公式：细胞存活率(%) = [(实验孔OD值 - 空白孔OD值) / (对照孔OD值 - 空白孔OD值)] × 100%。

　　三、 发光法(ATP检测)

　　ATP发光法被公认为细胞活力检测的“金标准”。活细胞内含有ATP，在荧光素酶和镁离子存在下，ATP与荧光素反应产生光信号。发光强度与ATP浓度(即活细胞数量)呈线性关系。

　　优势：操作极为简单(一步法)，反应仅需10分钟左右，且灵敏度极高，不受化合物自发荧光的干扰。

　　适用场景：高通量药物筛选、细胞毒性测试。

　　四、 荧光法

　　利用特异性荧光染料区分死活细胞，通常结合荧光显微镜或流式细胞术进行分析。

　　原理：例如使用Calcein AM(钙黄绿素)和PI(碘化丙啶)双染。活细胞内的酯酶将Calcein AM转化为发出绿色荧光的产物;而死细胞因膜受损，PI进入细胞核发出红色荧光。

　　优势：能够直观地在单细胞水平上观察细胞状态，适合进行多重参数分析。

　　五、 其他检测方法

　　LDH释放法：乳酸脱氢酶(LDH)是胞浆酶，当细胞受损或死亡时，LDH会释放到培养基中。通过检测培养上清中的LDH活性，可定量评估细胞毒性。

　　克隆形成试验：通过评估单个细胞增殖形成克隆的能力，反映细胞的长期存活与增殖活力。

　　总结建议：若仅需快速了解细胞复苏或传代后的状态，首选台盼蓝染色法;若进行药物毒性筛选或细胞增殖实验，推荐使用CCK-8法或ATP发光法;若需深入研究细胞凋亡机制或进行多色分析，则应选择荧光法/流式细胞术。为了获得可靠的结果，建议在实际研究中结合多种方法进行综合验证。

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