BLI生物层干涉技术：抗体筛选与表位分组的利器

　　生物层干涉(Bio-Layer Interferometry, BLI)技术作为一种强大的无标记、实时分子互作分析工具，在抗体药物研发领域扮演着至关重要的角色，尤其在抗体筛选与表位分组这两个关键环节中展现出显著优势。

　　核心优势：为何选择BLI?

　　为何选择BLI?

　　BLI技术之所以成为抗体研究的利器，主要得益于其独特的技术特点：

　　无标记实时检测：无需对样品进行荧光或放射性标记，能够保持抗体和抗原的天然构象与活性，实时监测结合与解离的全过程。

　　高通量并行分析：支持8至16个通道同时检测，极大地提升了筛选效率，适合对大量杂交瘤上清液或纯化后的抗体进行快速评估。

　　样品兼容性强：可以直接分析粗提样品，如细胞裂解液、血清或杂交瘤细胞培养上清，减少了繁琐的纯化步骤。

　　提供关键动力学参数：能够精确测定抗体与抗原相互作用的动力学参数，包括结合速率常数 (ka)、解离速率常数 (kd) 和亲和力常数 (KD)，为抗体评价提供量化依据。

　　应用一：高效抗体筛选与亲和力排序

　　在抗体发现的早期阶段，研究人员需要从成千上万个候选克隆中筛选出能特异性结合目标抗原的抗体。BLI技术在此环节发挥着核心作用：

　　直接筛选粗样：将抗原固定在生物传感器探针上，直接浸入含有抗体的杂交瘤细胞培养上清液中。BLI系统可以实时检测并结合信号，快速识别出阳性克隆。

　　亲和力排序：对筛选出的阳性抗体，通过设置不同浓度的抗原或抗体进行分析，BLI可以精确计算出每个抗体的亲和力常数(KD)。KD值越小，代表抗体与抗原的结合越强。通过对候选抗体进行亲和力排序，可以快速锁定高亲和力的“头对头”候选分子，进入后续开发流程。

　　应用二：精准抗体表位分组

　　表位分组旨在鉴定不同抗体是否结合在抗原的相同或不同区域(即表位)。这对于理解抗体作用机制、避免功能冗余以及开发双特异性抗体至关重要。BLI技术通过“三明治”夹心实验(Sandwich Assay)可以高效完成表位分组。

　　典型实验流程

　　固定第一抗体 (Ab1)：将第一个抗体(Ab1)固定在生物传感器的探针表面。

　　结合抗原：将探针浸入抗原溶液中，使抗原与Ab1充分结合至饱和。

　　结合第二抗体 (Ab2)：将结合了抗原的探针浸入第二个抗体(Ab2)的溶液中。

　　结果判读：

　　信号增强：如果观察到信号进一步增加，说明Ab2能够与已结合在Ab1上的抗原结合，即Ab1和Ab2识别的是抗原上不同的表位。

　　信号无变化：如果信号没有明显变化，说明Ab2无法结合，意味着Ab1和Ab2竞争结合相同或空间上重叠的表位。

　　通过这种方式，可以对大量抗体进行两两组合测试，从而将它们划分到不同的表位组中，为后续选择功能互补的抗体组合提供关键信息。

　　技术对比：BLI与SPR

　　BLI与表面等离子体共振(SPR)是两种主流的无标记分子互作分析技术。虽然原理相似，但在实际操作中各有侧重：

       来源：网络