抑制剂筛选SPR筛选模式

　　基于表面等离子体共振 (SPR) 的抑制剂筛选 是一种强大的生物物理技术，广泛应用于药物发现的早期阶段(Hit Identification)和先导化合物优化(Lead Optimization)。

　　与传统的生化酶活实验(如荧光、发光法)不同，SPR 直接检测分子间的结合事件，无需标记，能提供实时的结合动力学数据 ( kon,koffkon​,koff​ ) 和亲和力 ( KDKD​ )，并能有效区分特异性结合与非特异性结合。

　　主要筛选模式 (Screening Modes)

　　根据通量和目的不同，SPR 筛选主要分为三种模式：

　　1. 直接结合筛选 (Direct Binding Screen)

　　原理：将靶蛋白固定在芯片上，依次流过化合物库中的小分子。

　　适用：片段筛选、中等通量筛选 (几百到几千个化合物)。

　　流程：

　　固定靶蛋白。

　　注入单浓度化合物(通常为高浓度，如 100 μμ M - 1 mM，取决于溶解度)。

　　观察响应信号 (RU)。超过阈值(如 > 3-5 RU 或 > 3倍标准差)的视为 Hit。

　　对 Hit 进行浓度梯度测试以测定 KDKD​ 。

　　优点：直观，直接发现结合分子。

　　缺点：通量相对较低;需排除非特异性结合(疏水性化合物易吸附)。

　　2. 竞争结合筛选 (Competition / Displacement Screen) —— 常用的高效筛选模式

　　原理：利用一个已知的高亲和力参考配体(Reference Ligand)，检测待测化合物是否能竞争性地抑制参考配体的结合。

　　适用：针对特定活性位点的筛选、验证已知结合位点的抑制剂、高通量二级筛选。

　　流程 (Sandwich 或 Pre-mix 模式)：

　　模式 A (预混合)：将化合物与参考配体混合后注入蛋白芯片。若化合物是抑制剂，参考配体的结合信号会下降。

　　模式 B (三明治/顺序注入)：先注入化合物，不清洗(或快速清洗)，紧接着注入参考配体。若化合物占据了结合位点，参考配体的结合信号会降低或消失。

　　优点：

　　高灵敏度：即使小分子本身信号弱，也能通过参考配体信号的显著变化检测出来。

　　位点特异性：只筛选针对参考配体结合位点(通常是活性中心)的抑制剂，自动过滤掉结合在别处的非特异性分子。

　　高通量：适合自动化运行。

　　3. 表位/位点作图 (Epitope/Site Mapping)

　　原理：确定抑制剂结合在蛋白的哪个区域(是否与底物竞争，是否为变构位点)。

　　方法：类似竞争筛选，但使用不同的已知配体(如底物类似物、抗体、变构调节剂)作为探针，看抑制剂是否影响它们的结合。

       来源：网络