cck8检测细胞增殖实验流程

　　CCK-8(Cell Counting Kit-8)法是目前常用、便捷的体外细胞增殖与毒性检测方法之一，广泛应用于药物筛选、细胞毒性评价、生物材料相容性测试等领域。其原理基于活细胞线粒体脱氢酶活性，具有操作简单、灵敏度高、无放射性等优点。

　　标准操作流程(以96孔板为例)

　　【实验前准备】

　　细胞：对数生长期，消化后计数;

　　CCK-8 试剂：4℃避光保存，使用前平衡至室温;

　　培养基：无酚红培养基可减少背景(非必需)。

　　【步骤】

　　接种细胞

　　将细胞悬液接种于 96 孔板(通常 100–5000 个/孔，依细胞类型优化);

　　设空白对照(只加培养基 + CCK-8)、阴性对照(正常细胞)、实验组(加药物/材料提取液);

　　每组设 3–6 个复孔。

　　处理细胞

　　贴壁细胞：先贴壁 24 h，再加药处理;

　　悬浮细胞：直接与药物共孵育。

　　加入 CCK-8 试剂

　　按 10% 培养基体积 加入 CCK-8(如 100 μL 培养基 + 10 μL CCK-8);

　　轻轻混匀(避免产生气泡)。

　　孵育

　　37°C、5% CO₂ 培养箱中孵育 1–4 小时(依细胞密度调整);

　　避免超过 4 小时(甲臜积累可能抑制细胞)。

　　测定 OD 值

　　用酶标仪在 450 nm 波长下读取吸光度;

　　可选参考波长 600–650 nm 扣除背景。

       来源：网络