bli生物膜层干涉技术实验流程

　　生物膜层干涉技术(Bio-Layer Interferometry, BLI) 是一种无标记、实时、高通量的生物分子相互作用分析技术，由 ForteBio(现属 Sartorius) 开发，广泛应用于抗体表征、蛋白–配体结合、受体–药物筛选、病毒–宿主互作等领域。

　　与 SPR(表面等离子体共振)类似，但无需微流控系统，采用“浸入–取出”式操作，样品消耗少、操作简便、通量高。

　　标准实验流程(以“His-tag 蛋白 + 小分子抑制剂”为例)

　　步骤 1：基线平衡(Baseline)

　　将 NTA 传感器浸入运行缓冲液(如 PBS + 0.1% BSA + 0.02% Tween-20);

　　时间：60–120 秒;

　　目的：稳定信号，消除漂移。

　　步骤 2：配体固定(Loading)

　　浸入 His-tag 蛋白溶液(5–50 μg/mL);

　　固定至 0.3–1.5 nm(避免过高导致位阻或非特异吸附);

　　时间：60–300 秒(根据信号上升速度调整)。

　　步骤 3：基线2(Baseline 2)

　　再次浸入缓冲液，洗去未结合蛋白;

　　时间：60 秒。

　　步骤 4：结合相(Association)

　　将传感器浸入梯度稀释的小分子溶液(如 0.1, 0.3, 1, 3, 10, 30 μM);

　　时间：180–600 秒(根据结合速度调整);

　　实时记录结合信号。

　　步骤 5：解离相(Dissociation)

　　转入缓冲液，观察复合物解离;

　　时间：180–1800 秒(慢解离需更长时间)。

　　步骤 6：再生(Regeneration，可选)

　　若需重复使用传感器，用再生液(如 10 mM glycine pH 2.0)去除结合物;

　　验证信号恢复至初始水平。

　　通量优势：Octet R8 可同时运行 8 个样品，R16 支持 16 通道并行，适合筛选。

       来源：网络