电子显微镜样本固定液类型

　　电镜(电子显微镜)样本制备中，固定液(Fixative)是决定超微结构保存质量的关键第一步。其核心目标是快速、稳定地“冻结”细胞/组织的天然结构，防止自溶、腐败和人工假象，同时为后续脱水、包埋、染色提供良好基础。

　　1. 戊二醛(Glutaraldehyde, GA)

　　作用机制：交联固定(与蛋白质氨基形成 Schiff 碱)

　　优点：

　　优异的结构保存能力(尤其膜系统、细胞器);

　　稳定、低收缩;

　　可长期保存样本。

　　缺点：

　　渗透较慢(>1 mm 组织需灌注);

　　对核酸、多糖固定弱;

　　自发荧光干扰(若需 Correlative Light-EM)。

　　常用浓度：2–5%(用 0.1 M 磷酸盐或 cacodylate 缓冲液配制，pH 7.2–7.4)

　　TEM 样本首选初固定剂

　　2. 多聚甲醛(Paraformaldehyde, PFA)

　　作用机制：交联固定(比戊二醛弱)

　　优点：

　　渗透较快;

　　抗原性保留较好(适合免疫电镜);

　　无自发荧光。

　　缺点：

　　结构保存不如戊二醛(膜易模糊)。

　　常用浓度：2–4%(新鲜配制，加热溶解后过滤)

　　 常与戊二醛联用(如 2% PFA + 2.5% GA)

　　3. 四氧化锇(Osmium Tetroxide, OsO₄)

　　作用机制：次级固定 + 染色

　　氧化不饱和脂质，稳定膜结构;

　　与蛋白质、核酸结合，增加电子密度。

　　优点：

　　极佳的膜系统对比度;

　　固定脂质(戊二醛无法固定)。

　　缺点：

　　剧毒(挥发性强，需通风橱操作);

　　渗透极慢(仅用于后固定);

　　使组织变脆。

　　常用浓度：1–2%(用相同缓冲液配制，室温避光 1–2 小时)

　　TEM 必需的后固定步骤

　　不可单独作为初固定剂

　　4. 高锰酸钾(KMnO₄)

　　替代 OsO₄ 的廉价方案，对植物细胞壁、细菌膜效果好;

　　但对比度和通用性不如 OsO₄，现已少用。

       来源：网络