mtt法检测细胞活性实验要点

　　MTT法检测细胞活性是一种广泛应用于细胞生物学、药理学和毒理学研究的经典比色法，用于评估细胞的增殖能力或毒性反应。该方法基于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶(SDH)能将黄色的MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶——甲臜(Formazan)，其生成量与活细胞数量成正比。

　　一、核心原理

　　活细胞线粒体中的‌琥珀酸脱氢酶‌能将外源性MTT(噻唑蓝)还原为‌水不溶性蓝紫色甲瓒结晶‌(Formazan)，其生成量与活细胞数量成正比‌。死细胞无此功能，通过‌二甲基亚砜(DMSO)溶解结晶‌后，在‌570nm波长‌下测定吸光度(OD值)即可量化细胞活性‌。

　　二、实验流程要点

　　‌细胞接种‌

　　贴壁细胞：96孔板每孔接种1000~10000个细胞，边缘孔用PBS缓冲液填充以减少蒸发误差‌。

　　悬浮细胞：需离心去除培养液后接种‌。

　　‌MTT处理‌

　　终浓度：0.5mg/mL(5mg/mL MTT溶液按1:10稀释)‌。

　　孵育时间：37℃避光培养4小时‌。

　　‌结晶溶解与检测‌

　　移除上清液，每孔加入150μL DMSO或专用溶解液，震荡10分钟‌。

　　酶标仪检测570nm吸光度(推荐范围0.1~1.0)‌。

　　三、关键注意事项

　　‌细胞密度优化‌：预实验确定z佳接种量，避免OD值超出线性范围‌。

　　‌血清浓度控制‌：培养液胎牛血清浓度需<10%，减少背景干扰‌。

　　‌MTT保存‌：4℃避光保存(铝箔包裹)，有效期≤2周‌。

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