分子互作检测方法方式哪个好？

　　生命活动的根底是生物分子间以及生物分子与其它分子间的互相作用。分子互作目前分为三个大类：核酸与核酸互作、核酸与蛋白互作、蛋白与蛋白互作。

　　e测试能够为您提供分子互作机制研讨效劳，特别是基于SPR技术对生物分子停止辨认及定量检测。

　　1、核酸与核酸互作

　　miRNA与mRNA结合调节体内基因的表达，从而影响蛋白的表达、修饰、酶活性等生命活动的进行。lncRNA作为体内的ceRNA与miRNA结合起到调节基因表达的作用。研究lncRNA与miRNA的相互作用对于研究生命具有重要的意义。

　　MS2-RIP以及高灵敏度的双萤光素酶技术被广泛应用于lncRNA和miRNA互做的研究。

　　MS2-RIP技术，其原理是通过带Protein G磁珠的GEP抗体将相应的RNA-蛋白复合物拉下来，经过分离纯化后通过q-PCR验证或者测序对结合在复核物上的RNA进行分析。

　　双萤光素酶报告系统

　　双萤光素酶报告基因通常是海肾荧光素酶为内对照，使萤火虫荧光素酶报告基因的检测归一化。其优势在于作归一化可消除实验过程中减弱实验准确度的变化，如培养细胞的数量、细胞转染及裂解的效率等。

　　2、核酸-蛋白互作

　　相比核酸与核酸互作，核酸与蛋白互作更为常见。基因的复制、转录、翻译、修饰等过程都离不开核酸和蛋白的互作。常用的研究方法：RNA pull down+质谱(MS)、染色质免疫共沉淀(chip)、凝胶迁移或电泳迁移率检测(EMSA)、酵母单杂交(Yeast one-hybrid)、DNA pull down等。

　　RNA pull down

　　RNA pull down实验利用体外转录法标记生物素RNA 探针，与胞浆蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白质复合物。此复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，之后与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过WB 实验检测特定的RNA 结合蛋白是否与RNA 相互作用。若待检测目的蛋白明确，选择WB鉴定;若不明确，则可选择质谱鉴定。

　　DNA Pull down

　　DNA pull down实验是针对待研究目的基因的调控区域设计并制备特异性探针;同时制备细胞核提取物;将探针和核提取物共同孵育，DNA结合蛋白就会和靶向序列特异性结合;然后，通过亲和素磁珠纯化蛋白质DNA复合物;z后针对获得的蛋白，使用WB验证或者质谱方式鉴定蛋白质类型。

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