① 标准曲线的绘制;
② 根据样品数量,按 BCA 试剂 A :BCA 试剂 B(50:1)配制适量 BCA 工作液,充分混匀;
③各孔加入 200μL BCA 工作液;
④把酶标板放在振荡器上振荡 30sec,37℃放置 30 min,然后在 562nm
下比色测定。以蛋白含量(μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线;
⑤稀释待测样品至合适浓度,使样品稀释液总体积为 20μL,加入 BCA 工作液 200μL,充分混匀,37℃放置 30 min后,以标准曲线 0
号管做参比,在 562nm 波长下比色,记录吸光值;
⑥
根据所测样品的吸光值,在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量(μg),除以样品稀释液总体积(20μL),乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度(单位:μg/μL)。
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